分子生物学实验技术.ppt

分子生物学实验技术一、基因克隆技术获得基因序列：通过RT-PCR或基因组数据库获得质粒转化大肠杆菌的过程非定向克隆克隆的片段只能按

特定方向连接EcoRI+HindIII切（二）基因组DNA文库构建基因组DNA文库的构建基因组DNA文库的构建流程插基因组DNA文库与cDNA文库的比较（三）PCR衍生技术实时荧光定量PCR荧光定量PCR化学原理1、SYBRGreen法SYBRGreen熔解曲线分析2、TaqMan探针法TaqMan作用机理原位PCR技术原理重叠延伸PCR技术由于使用了具有互补末端的引物，使PCR产物形成了重叠链，从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸，将不同来源的扩增片段重叠拼接起来。可简单迅速的将两个DNA片段连在一起，用于嵌合基因的构建二、基因组学研究三、DNA-蛋白互作技术酵母单杂交酵母双杂交凝胶阻滞DNaseI足迹染色质免疫共沉淀（ChiP）四、蛋白组学研究蛋白质分离蛋白质分析噬菌体展示技术表面等离子共振技术（SPR）荧光共振能量转移技术作为规模化功能蛋白质组学研究的手段的蛋白质芯片技术，是DNA芯片技术的扩展，即在固体支持物表面高密度地固定化排列探针蛋白点阵，以特异地捕获样品中的靶蛋白，然后通过检测器对靶蛋白进行定性或定量分析。免疫共沉淀技术Pull-down技术蛋白质表达模式研究流程