第五章黄连.docx

第五章黄连不同炮制品中主要生物碱体内分布研究
黄连为毛茛科多年生草本植物黄连CoptischinensisFranch的根茎[1],其活性成分为黄连生物碱。石柱黄连(味连)含小檗碱50%左右,而小檗碱、药根碱、巴马汀和黄连碱等4个生物碱之和占总生物碱的90%左右[2]。有关小檗碱的药代动力学研究较多[3-4],其他黄连生物碱的药代动力学研究相对较少[5]。中药成分在动物体内的代谢与作用网络具有/网通虹势规律[6-7]:中药材成分群往往是同一母核的多种衍生物,药理作用相似;同一母核的有效成分衍生物群在动物内可以相互抑制、加速及转化,其代谢网络相容相通;动物内存在巨大的与自然界类似的以CYP450酶为主导的代谢酶网络系统,按CYP450进化树的关系对中药及复方成分组群进行代谢和产生药效。黄连生物碱的结构类似,均是异喹啉类生物碱的衍生物。这些生物碱之间在动物体内是否存在相互之间的转化。
黄连为毛茛科植物黄连（CoptischinensisFranch.）、三角叶黄连（CoptisdeltoideaC.Y.ChengetHsiao）、或云连（CoptisteetaWall.）的干燥根茎。具有清热燥湿、泻火解毒功效，始载于《神农本草经》，列为上品[1]（[1]魏•吴晋等述.神农本草经.清•孙星衍，孙冯翼辑.北京：人民卫生出版社，1982.26）。也称味连、鸡爪连、川连，目前主要产地为湖北省利川市、重庆市石柱县。其性味苦，寒，归心、脾、胃、肝、胆、大肠经。根茎含多种异喹啉类生物碱，其主要活性成分为小檗碱、黄连碱、表小檗碱、药根碱、巴马汀、非洲防己碱、Groenlandicine等生物碱。有文献报道，总生物碱的含量高达10%以上，盐酸小檗碱、药根碱、表小檗碱、巴马汀、黄连碱五种生物碱占据黄连总生物碱含量的98%以上。其中以小檗碱含量最高为50%以上[2]（[2]钟国跃,黄小平,马开森,等.我国黄连(味连)质量评价研究[J].中国中药杂志,2005,30(7):5941）现代药理研究表明，黄连具有抗菌、消炎、止痛、解毒、退热、驱风、健胃、利胆、降血糖、降血脂、降血压、抗肿瘤、扩张血管，以及治疗腹泻、痢疾等功效，临床主要用于肠胃湿热和痛肿疗毒等症的治疗。目前有关小檗碱的药代动力学及体内分布研究较多[3-4]（[3]吴晓霞,彭娟,范斌,等1.LC-MS-MS测定黄连解毒汤中3种生物碱在大鼠血清的含量及其药代动力学研究[J].中国中药杂志,2009,34(10):12761.[4]赵玉男,邢东明.解热药YL2000中小檗碱在正常和发热大鼠体内的药物动力学比较[J].中国药理学通报.2003,19(10):1170），其他黄连生物碱的药代动力学及体内分布研究相对较少[5](李亚梅,叶小利,李雪梅,等.助剂对小鼠吸收黄连总生物碱的影响及药代动力学的研究[J].中国中药杂志,2009,34(3):3441)。
本研究以黄酒为辅料，经炒制、蒸制炮制方法处理后，黄连不同炮制品所含主要生物碱在体内不同组织脏器的分布情况，力图从体内分布角度揭示“三焦”理论。
1．材料
1.1动物SD小鼠,体重(18-20g),雌雄各半,由南京中医药大学动物中心提供,合格证号SCXK(渝)2007-0001。
1.2仪器与试剂
（1）仪器：液质联用系统：SHIMADZUUFLCXR超快速液相色谱仪（日本岛津公司，包括LC-20AD型输液单元，STL-20AXR型自动进样器，CTO-20AC型柱温箱）；ABSCIEXQTRAP5500型质谱仪（美国ABSCIEX公司），Analyst1.5软件；KQ5200DA型数控超声波清洗器；TG16-W微量高速离心机,组织匀浆器。
（2）试剂：盐酸药根碱（纯度≥98%，批号960383-96-4;表小檗碱（纯度≥98%，批号MUST-11022503）；黄连碱（纯度≥98%，批号3486-66-6）；盐酸巴马汀（纯度≥98%，批号10605-02-4）；盐酸小檗碱（纯度≥98%，批号633-65-8）；四氢巴马汀（）等均购自成都曼思特生物科技有限公司,含量98%以上；其他试剂均为分析纯或色谱纯。
1.3药材及炮制方法
黄连采挖自湖北省恩施州利川市佛宝山官康彬农户五年生黄连，经南京中医药大学陈建伟教授鉴定为毛茛科植物黄连（CoptischinensisFranch.），习称“味连”、“鸡爪连”。
黄连生品：黄连药材经产地加工，火燎去须根和泥沙，干燥，撞去残留须根，强水抢洗，切片，干燥后即得。（南京海源中药饮片公司，批号）
黄连酒炒品：取上述生黄连生饮片适量，加黄酒拌匀，闷透，置铁锅内，用文火慢慢炒制，炒至色泽加深，略带酒香气时取出，干燥后即得。黄连每1kg,用黄酒kg。（南京海源中药饮片公司，生产批号：）
黄连酒蒸品：取上述生黄连饮片，加黄酒拌