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蒙古口蘑原生质体的制备与再生研究
蒙古口蘑是一种常见的食用菌类，具有营养丰富、味道鲜美等特点。在菌类培养中，质体是承担物种遗传多样性、基因功能调节、基因工程改良等方面的重要元素。因此，本文将介绍蒙古口蘑原生质体的制备与再生研究。
一、原生质体制备方法
原生质体是由细胞质膜失去完整性而形成的细胞质液胞。制备原生质体的方法一般分为机械法、酶解法和化学法等多种。这里介绍一种基于酶解法的原生质体制备方法。
1.实验材料和设备
蒙古口蘑菌丝体、酵母oligo、纤维素酶、β-葡萄糖苷酶、荧光素二酸钠、氯化钙、PEG6000、余氯水等。
2.实验步骤
(1)将蒙古口蘑菌丝体生长于1/4马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，培养28°C，4天后取出。
(2)将蒙古口蘑菌丝体置于2%纤维素酶、0.4%β-葡萄糖苷酶和0.6mol/L蔗糖的组合液中，50rpm振荡培养4h，筛去固态残渣。
(3)将受理液过1层网（212μm），离心1min，除去上清液后再过筛（57μm），声波振荡去除残渣。
(4)加入氯化钙（2mmol/L）、荧光素二酸钠（10μmol/L）和PEG6000（16%）、余氯水至最终体积，轻轻溶解，储于0°C。
二、原生质体再生方法
原生质体再生是将原生质体恢复为正常细胞的过程。再生方法通常包括电孵化法、钙离子诱导法、PEG联合钙离子法等多种。下面介绍一种较为简单的PEG联合钙离子法。
1.实验材料和设备
原生质体、PEG6000、柠檬酸、钙离子、乙二胺四乙酸（EDTA）、琼脂等。
2.实验步骤
(1)将原生质体与PEG6000混合悬浮于0°C的含钙离子和柠檬酸的交替处理液中，让其缓慢地升温至11°C孵育12h。
(2)将孵育液中的细胞质液胞过滤后培养于含20%葡萄糖、5%酵母提取物和0.8%琼脂的培养基上，28°C下培养数天。
(3)观察培养基中是否有细胞生长，如有，说明再生成功。
三、结论
本文介绍了一种基于酶解法的蒙古口蘑原生质体制备方法和一种较为简单的PEG联合钙离子法再生方法。这些方法可以为蒙古口蘑的育种、基因工程等方面的研究提供一定的技术支持。同时，在制备和再生过程中要注意实验条件的控制，使实验结果更加准确可靠。