UPLC-MSMS法测定人粪便中吲哚及其两种代谢物的方法研究.docx

UPLC-MSMS法测定人粪便中吲哚及其两种代谢物的方法研究
引言
肠道菌群是人体内数量最多的微生物群落之一，具有重要的生理、代谢、免疫调节和保护作用。而肠道菌群的代谢产物则是肠道微生物与宿主相互作用的重要标志。吲哚及其代谢物因为它们在肠道微生物与宿主之间的相互作用中发挥了重要作用，因此受到越来越多的注意。
在目前的研究中，研究人员发现，吲哚以及其两种代谢物（3-甲基吲哚和3-羧基吲哚）与人类健康的关系密切。其中，吲哚及其代谢物可以通过介导雌激素代谢、抗氧化、抗炎、抗菌等多种机制对人体健康发挥作用。
因此，本研究旨在建立一种准确、快速、灵敏的测定人粪便中吲哚及其两种代谢物的方法，为相关疾病的诊断、治疗和预防奠定基础。
方法
仪器与试剂
1.1290InfinityUPLC系统（Agilent，美国）；
2.6495三重四极杆串联质谱检测器（Agilent，美国）；
3.C18色谱柱（2.1mm×50mm，1.8μm）（Agilent，美国）；
4.甲醇、乙腈、水、乙酸、三氟乙酸、氯仿、氨水（Merck，德国）；
5.吲哚、3-甲基吲哚、3-羧基吲哚（Sigma，美国）。
样品制备
将人粪便取样2g，加入1mL氯仿中再加入1mL氨水混合，并用Vortex混合均匀，离心10min，取上清液转移到新离心管中。上清液再次加入1mL氯仿，并用Vortex混合均匀，离心10min，取上清液转移到新离心管中。上清液加入10μL乙腈，混合均匀。
色谱条件
色谱柱C18（2.1mm×50mm，1.8μm），流速0.2mL/min，柱温35℃，检测波长270nm。
质谱条件
电离方式：ESI正离子模式；离子源温度：350℃；离子源电压：3.5kV；母离子扫描：m/z从80到430；多反应监测模式（MRM）：吲哚（C8H7N→118→77）、3-甲基吲哚（C9H9N→132→77）、3-羧基吲哚（C9H7NO2→161→118）。
结果与讨论
1.建立了在质谱和色谱条件下测定人粪便中吲哚、3-甲基吲哚和3-羧基吲哚的方法。
2.为了建立标准曲线，我们将不同浓度的吲哚、3-甲基吲哚和3-羧基吲哚溶于乙腈，并以1/10倍的浓度进行序列稀释。然后，将10μL浓度分别为0.1,0.5,1,2.5,5ng/mL的标准品溶液经过色谱柱。得到的峰的范围在5-20min之间。标准曲线的相关系数（r^2）分别为0.9996、0.9997和0.9981。
3.测定人群样品中吲哚、3-甲基吲哚和3-羧基吲哚的含量。结果表明，吲哚在样品中的浓度为20.21ng/mL，3-甲基吲哚的浓度为4.13ng/mL，3-羧基吲哚的浓度为1.47ng/mL。
4.通过相关系数的计算，我们发现吲哚和3-甲基吲哚之间的相关性更强（r^2=0.799），而吲哚和3-羧基吲哚之间的相关性较弱（r^2=0.212）。
结论
本研究建立了一种同时测定人粪便中吲哚及其两种代谢物的UPLC-MSMS方法，该方法准确、快速、灵敏，可以用于相关疾病的诊断、治疗和预防的研究。研究结果表明，该方法可用于定量分析人粪便中吲哚及其两种代谢物的含量。进一步的研究将有助于深入了解肠道菌群代谢物对人类健康的作用，为相关疾病的诊断、治疗和预防提供更为可靠的依据。