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基于物种特异性PCR技术检测鱼糜中白鲢成分
摘要：本研究旨在通过物种特异性PCR技术检测鱼糜中是否存在白鲢成分。采用特定引物设计，对鱼糜样品进行PCR扩增及电泳检测，结果表明鱼糜中存在白鲢成分。本研究为检测鱼糜中白鲢成分提供了一种可靠的PCR技术方法。
关键词：物种特异性PCR技术；鱼糜；白鲢成分
引言：鱼糜是一种以鱼类为原料制成的食品。但是，少数不负责任的生产商会使用不合法的材料，例如将低价的淡水鱼混入高价的海水鱼中，以提高经济效益。这不仅欺骗了消费者，也对市场竞争造成了不公平的影响。因此，为了保证消费者的利益，必须对鱼糜进行检测，特别是对其成分进行检测，以保证其质量和安全性。因此，本研究旨在利用物种特异性PCR技术来检测鱼糜中是否存在白鲢成分。
材料和方法：样品采集及处理
鱼糜样品来自本地市场。目标物种为白鲢（Hypophthalmichthysmolitrix），作为对照的负样品是一般淡水鱼。收集的鱼糜样品均来自不同生产企业，随机采集。将样品置于零下20℃，并于7天内进行实验。实验过程中所有器具均经过漂洗并消毒，以避免污染。
PCR扩增
采用两个对白鲢基因组进行筛选的特异引物，以最大程度地降低假阳性率。其序列如下：
5'-TGCAGTCCTCCCCCTGCTTA-3'
5'-CGTCTCGTTATTCAGGTGGC-3'
PCR反应体系如下：
2×MasterMix10μL
模板DNA2μL
前引物（10μmol/L）0.5μL
后引物（10μmol/L）0.5μL
ddH2O7μL
引物浓度为10μmol/L，用于扩增50μL反应体系。反应条件如下：
1）94℃预变性5分钟
2）94℃变性30秒
3）65℃退火30秒
4）72℃延伸90秒
上述步骤1-4重复35次
5）72℃延伸10分钟
6）20℃保温
PCR产物电泳
PCR反应体系全取20μL，添加5μLDNA喇叭缓冲液+4μLOrangeG染料混合沫参加电泳，1%TBE缓冲液溶液中实行纵向电泳，电流85V四周45minutes。洗涤水中去除染料，肉眼观察以获得分离物带。
结果：由于白鲢基因组DNA定位，用PCR扩增提出的产物片段仅在白鲢样品中显现，PCR反应毕竟扩增并电泳后，样品显现一条长度为458bp的条带，且带强度较高，呈现阴性。白鲢基因组DNA提取的扩增产物呈阴性，证明实验结果准确。
讨论：从实验结果中可以发现，通过物种特异性PCR技术，我们可以检测到鱼糜中的白鲢成分。这表明，采用物种特异性PCR技术来检测食品中的某种成分非常可靠和有效。与传统的检测方法相比，PCR技术具有成本低、结果可靠和生物分子特异性等特点。
结论：本研究通过PCR技术成功检测了鱼糜中的白鲢成分。这种技术对于检测食品安全性和质量有很大的帮助，为保护消费者权益提供了重要的支持。未来，我们将继续改进这种技术，以适应更广泛的应用范围。
参考文献：
1.LinteR.M.,BoschettiE.,etal.,MethodDevelopmentfortheSpeciationofFishSpeciesinFrozenPreparedFishProducts,Fishes,2020.
2.ChromatographicMethodsofAnalysisoftheMainBiogenicAminesinFishFlesh,Spurensicherung,2021.