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SATB1-shRNA下调Bc12表达诱导A549细胞凋亡
概述：
SATB1(SpecialAT-richbindingprotein1)是一种重要的转录因子，其过度表达已经在多种癌症中得到证实，包括肺癌。在A549细胞中，SATB1过度表达已经被证明具有肺癌细胞增殖和侵袭的促进作用。另一方面，Bc12是一种细胞凋亡抑制因子，肺癌细胞中其高表达与耐药性相联系。因此，研究SATB1和Bc12之间的相互作用对于肺癌治疗有着重要意义。本研究旨在通过使用SATB1-shRNA抑制SATB1表达，从而下调Bc12的表达，从而诱导A549肺癌细胞凋亡。
材料和方法：
1.细胞培养和病毒转染-A549肺癌细胞系在RPMI1640培养基中培养，并通过Lipofectamine2000转染pGPU6/SATB1-shRNA然后在培养基中添加2μg/mlpuromycin66h进行筛选，以获得SATB1shRNA稳定暴露的细胞株。
2.qPCR分析-从A549细胞中提取总RNA，通过cDNA合成的反转录过程和SYBRGreenI荧光信号的ApplBiosci的实时定量PCR检测Bc12和SATB1的表达水平。
3.Westernblot分析-A549细胞用RIPA缓冲液裂解，并在SDS-PAGE凝胶上通过Western免疫印迹检测SATB1和Bc12的蛋白质水平。
4.细胞增殖和细胞凋亡检测-以MTT实验和annexinV-FITC/PI双染实验检测SATB1shRNA对A549肺癌细胞增殖和细胞凋亡的影响。
结果：
1.SATB1shRNA诱导了A549细胞中SATB1mRNA和蛋白质的显着下降，同时Bc12mRNA和蛋白质的表达也显著降低。
2.与野生型细胞相比，SATB1shRNA稳定表达细胞中的细胞增殖水平显着降低，而细胞凋亡水平则显著增加。
结论：
本研究结果表明，通过抑制SATB1表达，可以下调Bc12的表达，从而诱导A549肺癌细胞凋亡。这表明Bc12在SATB1对肺癌细胞增殖的影响中发挥了重要作用，Satb1和Bc12可能成为治疗肺癌的新靶点。鉴于没有任何有效的噬菌体疫苗或对特定靶点的长期治疗策略，这种对新的治疗靶点开发的研究对治疗肺癌的未来有重大影响。