牛奶中酪蛋白的制备.doc

..2/2.牛奶中酪蛋白的制备一、实验目的1.学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。2.掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。二、实验原理利用酪蛋白的等点点为4.7，所以调节牛奶的pH4.7使酪蛋白沉淀洗出。等电点是调节溶液的pH,使蛋白质所带的正电荷和负电荷恰好相等，总净电荷为零，以两性离子存在，不想阳极移动也不想阴极移动，此溶液的pH称为蛋白质的等电点。酪蛋白不溶于乙醇、乙醚等试剂。因而加入乙醇乙醚洗涤沉淀物除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。三、实验材料、试剂与仪器（一）材料与试剂95%乙醇、新鲜牛奶、乙醇-乙醚混合液（乙醇：乙醚=1：1）0.2mol/LpH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称NaAC·3H2O27.22g，定容至1000mL。B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）6.0g定容至500mL。取A液590mL，B液410mL混合即得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液1000mL。（二）器具离心机、抽滤装置、精密pH试纸、玻璃棒、量筒、恒温水浴四、实验步骤（一）酪蛋白的粗提100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液100mL，用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000r/min）。弃去清液，得酪蛋白粗制品。（二）酪蛋白的纯化1.用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3000r/min），弃去上清液。2.在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇-乙醚混合液30mL洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。3.将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯品。（三）准确称重，计算含量和得率。