用于蛋白质的混合式色谱纯化的固相.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号CN103998456B(45)授权公告日2018.06.01(21)申请号201280062640.4(74)专利代理机构上海专利商标事务所有限公司31(22)申请日2012.10.19100代理人陶家蓉(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号CN103998456A(51)Int.Cl.C07K1/16(2006.01)(43)申请公布日2014.08.20C07K1/22(2006.01)(30)优先权数据C07K1/36(2006.01)61/549,1462011.10.19USB01D15/10(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日B01D15/20(2006.01)2014.06.18(56)对比文件(86)PCT国际申请的申请数据WO2009/126603A1,2009.10.15,全文.8242B2,2012.05.29,全文.PCT/US2012/0611542012.10.19US818US6498236B1,2002.12.24,全文.(87)PCT国际申请的公布数据US6919436B2,2005.07.19,说明书第6栏WO2013/059690EN2013.04.25第3-12行、第8栏第54-67行、第10栏第38-45行、(73)专利权人生物辐射实验室股份有限公司第11栏第9-18行、第12栏第26-33行、第24栏第12地址美国加利福尼亚州行、表1.(72)发明人J·廖L·奥列奇陈虹何学梅审查员习洋R·弗罗斯特权利要求书1页说明书8页附图2页(54)发明名称用于蛋白质的混合式色谱纯化的固相(57)摘要通过一种混合式色谱系统纯化蛋白质，该系统由将具有阳离子交换和疏水官能团的配体与大孔支持物基质连接而形成，配体与支持物基质之间仅通过疏水基团和支持物基质之间链连接，所述链具有不超过3个原子的主链。CN103998456BCN103998456B权利要求书1/1页1.一种从源溶液纯化蛋白质的方法，所述方法包含：(a)在pH4.0-6.0使所述源溶液接触混合式色谱介质，所述混合式色谱介质包含与固体支持物偶联的配体，所述配体包含苯甲酰氨基乙酸，所述固体支持物具有中值直径为0.5微米或更大的孔并且没有直径为0.1微米或更小的孔，并且所述配体由苯环通过1-3个原子的链偶联至所述固体支持物，以使所述源溶液中的所述蛋白质通过所述配体结合至所述固体支持物；以及(b)从所述固体支持物上洗脱由此结合的所述蛋白质；所述链是位于所述苯甲酰氨基乙酸的苯环上的对位的氨基，从而所述配体和链一起构成2-(4-氨基苯甲酰氨基)乙酸基团。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白质是抗体。3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(b)在6.1-8.5的pH下实施。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固体支持物由中值粒径为25微米-150微米的颗粒组成。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固体支持物是膜。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固体支持物是整料。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述源溶液含有浓度为50mM-300mM的选自碱金属和碱土金属卤化物的盐。8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述源溶液含有浓度为100mM-150mM的选自碱金属和碱土金属卤化物的盐。9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白质是非抗体蛋白质。2CN103998456B说明书1/8页用于蛋白质的混合式色谱纯化的固相[0001]相关申请的交叉引用[0002]本申请要求2011年10月19日提交的美国临时专利申请号61/549,146的优先权，通过引用将该申请的内容全文纳入本文。[0003]发明背景[0004]1.技术领域[0005]提供了用于纯化或分离目的的从液体源提取免疫球蛋白或其他蛋白质的技术，特别的重点在于色谱分离技术和材料。[0006]2.现有技术说明[0007]从主要是哺乳动物体液或细胞培养收获物的液体源提取免疫球蛋白和其他蛋白质通常对于得到充分浓缩或纯化形式的用于诊断和治疗用途以及实验室研究的蛋白质而言是重要的。然而，蛋白质(尤其是免疫球蛋白)的纯化通常受到以下因素的影响：低产率、使用昂贵的分离介质、分离介质浸入产物中，和在提取过程中使用的外源性材料的安全控制的影响。本发明设法解决这些问题中的至少一些。发明内容[0008]已经发现可以通过使用混合式色谱系统来实现对免疫球蛋白和其他蛋白质的异常高效提取(即纯化)，该混合式色谱系统结合阳离子交换和疏水官能团以及大孔支持基质。将阳离子交换和疏水性官能团被纳入配体中，使该配体结合至固体基质，所述固体基质具有0.5微米或更大的中值直径的孔(基本上没有直径小于