一种O型口蹄疫疫苗候选株及其构建方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115896043A(43)申请公布日2023.04.04(21)申请号202210793288.7C12N15/62(2006.01)(22)申请日2022.07.07C12N15/85(2006.01)A61K39/135(2006.01)(71)申请人中国农业科学院兰州兽医研究所A61P31/14(2006.01)地址730000甘肃省兰州市城关区盐场堡C12R1/93(2006.01)徐家坪1号(72)发明人李平花孙普查晶晶卢曾军袁红李冬包慧芳曹轶梅白兴文付元芳马雪青李坤赵志荀刘在新(74)专利代理机构兰州智和专利代理事务所(普通合伙)62201专利代理师张英荷(51)Int.Cl.C12N7/01(2006.01)C12N15/42(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表（电子公布）附图3页(54)发明名称一种O型口蹄疫疫苗候选株及其构建方法和应用(57)摘要本发明公开了一种O型口蹄疫疫苗候选株及其构建方法和应用，属于生物制品技术领域。本发明利用口蹄疫病毒的反向遗传操作技术，以嵌合口蹄疫当前流行毒株O/XJ/CHA/2017L+P1基因感染性克隆为骨架，进一步用口蹄疫病毒O/SCGH/CHA/2016株的G‑H环基因替换其对等基因，构建重组病毒rHN/XJ/SCGH。和亲本病毒rHN/XJ相比，重组病毒rHN/XJ/SCGH引起100％感染细胞病变的时间缩短到12h，复制滴度显著提高，重组病毒疫苗免疫猪能够对口蹄疫O型四个谱系流行毒产生高水平、保护性的交叉中和抗体，拓展了抗原谱。因此，本发明利用反向遗传操作技术构建的重组病毒rHN/XJ/SCGH适合做FMD疫苗候选株，用于我国当前O型口蹄疫的有效防控。CN115896043ACN115896043A权利要求书1/1页1.一种O型口蹄疫疫苗候选株，其特征在于：以重组口蹄疫病毒rHN/XJ的全长感染性克隆pQSA为骨架，嵌合了O/SCGH/CHA/2016毒株的G‑H环基因所得；所述重组口蹄疫病毒rHN/XJ的全长感染性克隆PQSA是以口蹄疫疫苗毒株O/HN/CHA/93的全长感染性克隆pOFS为骨架，嵌合了口蹄疫流行毒株O/XJ/CHA/2017的L+P1基因所得。2.根据权利要求1所述一种O型口蹄疫疫苗候选株，其特征在于：所述O/SCGH/CHA/2016毒株的G‑H环基因的核苷酸序列如SEQIDNO：5所示。3.根据权利要求1所述一种O型口蹄疫疫苗候选株，其特征在于：所述O/XJ/CHA/2017毒株的L+P1基因的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示。4.一种根据权利要求1～3任意一项所述O型口蹄疫疫苗候选株的构建方法，包括以下步骤：(1)以口蹄疫疫苗毒株O/HN/CHA/93半长质粒pSK‑Z123为模板，人工合成含口蹄疫流行毒株O/XJ/CHA/2017L+P1基因的重组质粒pSK‑Z123XJLP1；(2)以步骤(1)合成的重组质粒pSK‑Z123XJLP1为模板，人工合成含O型口蹄疫病毒O/SCGH/CHA/2016G‑H环基因嵌合的重组质粒pSK‑Z123XJLP1/SCGH；合成的质粒用SpeⅠ和BglⅡ限制性内切酶消化后回收约5400bp的目的片段，并将其插入用SpeⅠ和BglⅡ限制性内切酶消化的pOFS质粒中，得到重组全长质粒pQSQ；(3)将NotI线化的重组全长质粒pQSQ转染BSR/T7细胞，拯救重组口蹄疫病毒，得到O型口蹄疫疫苗候选株rHN/XJ/SCGH。5.一种基于权利要求1～3任一项所述的O型口蹄疫疫苗候选株或权利要求4所述构建方法构建的O型口蹄疫疫苗候选株在制备O型口蹄疫疫苗中的应用。6.根据权利要求5所述的O型口蹄疫疫苗候选株在制备O型口蹄疫疫苗中的应用，其特征在于：所述O型口蹄疫疫苗的防控对象为O/XJ/CHA/2017、O/Tibet/99、O/NXYCh/CHA/2018、O/SCGH/CHA/2016病毒株。2CN115896043A说明书1/8页一种O型口蹄疫疫苗候选株及其构建方法和应用技术领域[0001]本发明属于生物制品技术领域，涉及一种O型口蹄疫疫苗候选株及其构建方法和应用。背景技术[0002]口蹄疫(Foot‑and‑mouthdisease，FMD)是猪、牛和羊等主要家畜感染的一种烈性传染病。该病在我国流行已久，对畜牧养殖业的危害巨大。近10年来，我国主要流行A、O型FMD，其中A型FMD趋于控制，而O型FMD依然严重危害我国畜牧养殖业。分析近年来流行的O型口蹄疫病毒(Foot‑and‑mouthdiseasevirus，FMDV)，发现主要为三个拓扑型(中东‑南亚(ME‑SA)、东南亚(SEA)和古典中国型(Cathay))中的四个谱系病