用于鉴定小麦春化基因VRN‑B1的引物及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107653336A(43)申请公布日2018.02.02(21)申请号201711098024.5(22)申请日2017.11.09(71)申请人西北农林科技大学地址712100陕西省西安市杨凌区西北农林科技大学农学院(72)发明人张晓科王宪国张博李瑞博李哲王晓龙郝喜英(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人关畅张立娜(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书2页说明书6页序列表4页附图2页(54)发明名称用于鉴定小麦春化基因VRN-B1的引物及其应用(57)摘要本发明公开了一种用于鉴定小麦春化基因VRN-B1的引物及其应用。本发明提供了用于鉴定或辅助鉴定待测小麦春化基因VRN-B1的等位变异类型的引物组，由SEQIDNo.1、SEQIDNo.2和SEQIDNo.3所示的三条引物组成。利用本发明所提供的引物组进行一次多重PCR就可以对春化基因VRN-B1位点五种等位变异(包括已有四种等位变异和新等位变异Vrn-B1d)进行有效检测，本发明对于提高小麦育种选择效率，减少品种引种和推广盲目性具有重要意义。CN107653336ACN107653336A权利要求书1/2页1.用于鉴定或辅助鉴定待测小麦春化基因VRN-B1的等位变异类型的引物组，为根据Vrn-B1a、Vrn-B1b、Vrn-B1c、Vrn-B1d和vrn-B1五种基因的序列设计得到的能够区分所述待测小麦含有所述五种基因中哪一种的引物组；其中，Vrn-B1d基因的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示。2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于：所述引物组为如下(a1)或(a2)：(a1)由SEQIDNo.1、SEQIDNo.2和SEQIDNo.3所示的三条引物组成的引物组；(a2)由将SEQIDNo.1、SEQIDNo.2和SEQIDNo.3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的三条引物组成且具有相同功能的引物组。3.含有权利要求1或3所述引物组的试剂盒。4.方法，为如下(A)或(B)：(A)权利要求1或2所述引物组的制备方法，包括将权利要求1或2所述引物组中的各条引物分别单独包装的步骤；(B)权利要求3所述试剂盒的制备方法，包括如下步骤：将权利要求1或2所述引物组中的各条引物分别单独包装后，与下述物质中的至少一种包装在同一试剂盒内：PCR反应缓冲液、DNA聚合酶和4种dNTP。5.鉴定或辅助鉴定待测小麦含有Vrn-B1a、Vrn-B1b、Vrn-B1c、Vrn-B1d和vrn-B1这五种基因中哪一种的方法，包括如下步骤：(A)为如下(A1)或(A2)：(A1)以待测小麦的基因组DNA为模板，用权利要求2所述的引物组进行多重PCR反应；(A2)以待测小麦的基因组DNA为模板，用引物对1和引物对2分别进行PCR反应；所述引物对1由SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的两条引物组成；所述引物对2由SEQIDNo.2和SEQIDNo.3所示的两条引物组成；(B)检测步骤(A)得到的PCR产物的大小，按照如下方法确定所述待测小麦含有Vrn-B1a、Vrn-B1b、Vrn-B1c、Vrn-B1d和vrn-B1这五种基因中哪一种：若所述PCR产物中含有1541bp的DNA片段，则所述待测小麦含有或候选含有Vrn-B1a基因；若所述PCR产物中含有1505bp的DNA片段，则所述待测小麦含有或候选含有Vrn-B1b基因；若所述PCR产物中含有318bp的DNA片段，则所述待测小麦含有或候选含有Vrn-B1c基因；若所述PCR产物中含有1354bp的DNA片段，则所述待测小麦含有或候选含有Vrn-B1d基因；若所述PCR产物中含有870bp的DNA片段，则所述待测小麦含有或候选含有vrn-B1基因；所述Vrn-B1d基因的序列如SEQIDNo.4所示。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤(A1)中，进行所述多重PCR反应时，所述引物组中的三条引物在反应体系中的摩尔浓度比为1:1:1；步骤(A2)中，进行所述PCR反应时，所述引物对1和所述引物对2中的两条引物在反应体系中的摩尔浓度比均为1:1。7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：步骤(A1)中，进行所述多重PCR反应时，采用的退火温度为58℃；步骤(A2)中，进行所述PCR反应时，采用的退火温度为58℃。8.权利要求5-7中任一所述的方法在培育春性小麦品种中的应用。9.一种鉴定或辅助鉴定待测小麦冬春习性的方法，包括如下步骤：(1)检测待测小麦含2CN107653336A权利要求书2/2页有Vrn-B1a、Vrn-B1b、Vr