一种文心兰花粉离体萌发培养液及其制备方法和培养方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115678825A(43)申请公布日2023.02.03(21)申请号202211389987.1(22)申请日2022.11.08(71)申请人福建省农业科学院作物研究所地址350013福建省福州市晋安区新店埔垱(72)发明人罗远华钟淮钦方能炎林榕燕林兵(74)专利代理机构重庆信必达知识产权代理有限公司50286专利代理师刘会锋(51)Int.Cl.C12N5/04(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种文心兰花粉离体萌发培养液及其制备方法和培养方法(57)摘要本发明提供一种文心兰花粉离体萌发培养液及其制备方法和培养方法，涉及文心兰技术领域。该文心兰花粉离体萌发培养液，具体包括以下配方：1000ml培养液中含1.5～3.0gC6H13NO4S、50～150g蔗糖、0.01～0.03gH3BO3、0.04～0.08gCa(NO3)2·4H2O、0.02～0.04gMgSO4·7H2O、0.02～0.04gKH2PO4、4～6g聚山梨酯‑80。本发明提供一种文心兰花粉离体萌发培养液及其制备方法和培养方法，该方法具有详细的培养液配方、培养液制备方法和文心兰花粉的离体培养方法，其培养液能保持花粉形态完好，利于花粉分散，不易被细菌、真菌等微生物污染，利于镜检观察，花粉离体培养方法简便，重复性强，具生活力的花粉能快速萌发，萌发出的花粉管形态完整，可作为鉴定与分析文心兰花粉是否具有生活力的可靠方法。CN115678825ACN115678825A权利要求书1/1页1.一种文心兰花粉离体萌发培养液，其特征在于，具体包括以下配方：1000ml培养液中含1.5～3.0gC6H13NO4S、50～150g蔗糖、0.01～0.03gH3BO3、0.04～0.08gCa(NO3)2·4H2O、0.02～0.04gMgSO4·7H2O、0.02～0.04gKH2PO4、4～6g聚山梨酯‑80。2.根据权利要求1所述的一种文心兰花粉离体萌发培养液，其特征在于：所述配方中余量为蒸馏水。3.一种文心兰花粉离体萌发培养液的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：S1.将1.5～3.0gC6H13NO4S加600～800ml蒸馏水充分溶解；S2.然后依次加入50～150g蔗糖、0.01～0.03gH3BO3、0.04～0.08gCa(NO3)2·4H2O、0.02～0.04gMgSO4·7H2O、0.02～0.04gKH2PO4、4～6g聚山梨酯‑80，加入的每种药剂需充分溶解后再加入下一种，最后加蒸馏水定容至1000ml，混匀；S3.最后于121℃湿热灭菌20min，冷却至室温后可使用。灭菌后的培养液密闭条件下于5℃可存放60d，取用时在超净工作台上进行。4.一种文心兰花粉离体萌发方法，其特征在于，包括如下具体操作步骤：a.花粉团的消毒首先采集花粉团，然后在超净工作台上先用70％V/V酒精浸泡10～15S，移除酒精后再用1.0％NaClO消毒10～15min，无菌水清洗2～3次，备用；b.花粉粒的分散将消毒好的花粉团置入2ml无菌离心管中，添加利用权利要求1所述培养液1.0ml，浸泡45～60min后，用无菌尖头镊子轻夹花粉团，让花粉粒分散在培养液中，密闭离心管；c.花粉粒的培养在温度23～27℃，黑暗条件下培养24～72h；d.花粉萌发的观察经过24～72h的培养，具生活力的花粉能萌发出花粉管，在光学显微镜下可观察萌发及花粉管生长情况。5.根据权利要求4所述的一种文心兰花粉离体萌发方法，其特征在于：所述步骤d中统计花粉萌发率时，有花粉管长度≥花粉粒直径的花粉才被认作萌发的要求。6.根据权利要求4所述的一种文心兰花粉离体萌发方法，其特征在于：所述步骤a中将当天开放的花朵采集后用自封袋密封于冰盒中迅速带回室内，用尖头镊子从花朵蕊柱上采集花粉团。2CN115678825A说明书1/5页一种文心兰花粉离体萌发培养液及其制备方法和培养方法技术领域[0001]本发明涉及文心兰技术领域，具体为一种文心兰花粉离体萌发培养液及其制备方法和培养方法。背景技术[0002]文心兰是指文心兰属(Oncidium)植物及与其近缘属间杂交种的总称，栽培品种的遗传背景十分复杂。文心兰因花色丰富、花形奇特、花姿优美、且观赏期较长，是重要的观赏兰花，与蝴蝶兰、石斛、大花蕙兰并列为四大洋兰，具有较高的观赏价值和经济价值。我国文心兰种植规模不断增加，但生产用品种绝大多数依靠国(境)外引进，自主知识产权品种缺乏已成为我国文心兰产业发展的瓶颈。[0003]目前，杂交育种仍然是国内外育种家培育文心兰等兰科植物新品种最基本也是最重要的途径。但我国收集保存的文心兰品种资源不仅数量十分有限，且遗传背景过于复杂，除文心兰属内