一种鉴定桃花型性状的dCAPs分子标记及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115141894A(43)申请公布日2022.10.04(21)申请号202210595862.8(22)申请日2022.05.26(71)申请人河南农业大学地址450002河南省郑州市金水区文化路95号(72)发明人冯建灿连晓东高帆谭彬郑先波王小贝张海朋程钧王伟张郎郎叶霞李继东(74)专利代理机构北京华际知识产权代理有限公司11676专利代理师袁瑞红(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表2页附图2页(54)发明名称一种鉴定桃花型性状的dCAPs分子标记及其应用(57)摘要本发明公开了一种鉴定桃花型性状的dCAPs分子标记及其应用，所述花型包括铃型、蔷薇型，本发明通过在突变位点附近引入错配碱基而衍生出dCAPs标记，该标记具有共显性、位点特异、操作简单和成本低等优点，在品种分类和分子标记辅助育种中得到了广泛的应用。开发的dCAPs标记，在突变碱基处通过引入错配碱基G，获得SalI‑HF限制性内切酶位点，可对自然群体和杂交群体不同花型资源进行准确鉴定，准确率100％。通过开发的与花型性状相关的dCAPs标记，在表型与基因型验证中一致，可以作为一个分子标记，用于杂种后代分子标记辅助早期选择，对初步筛选不同花型桃种质资源具有重要的科学意义和经济价值。CN115141894ACN115141894A权利要求书1/1页1.一种鉴定桃花型性状的dCAPs分子标记，其特征在于，扩增所述分子标记的引物对的上游引物序列如SEQIDNO.1所示，下游引物序列如SEQIDNO.2所示，所述花型包括铃型和蔷薇型。2.一种如权利要求1所述的dCAPs分子标记在鉴定或辅助鉴定桃花铃型/蔷薇型性状中的应用。3.一种如权利要求1所述的dCAPs分子标记在桃花铃型/蔷薇型性状分子标记辅助选择育种方面的应用。4.一种试剂盒，其特征在于，包含权利要求1中所述的分子标记的引物对。5.一种如权利要求4所述的试剂盒在辅助选择育种方面的应用。6.一种鉴定桃花型性状的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)提取待测桃基因组DNA；(2)以步骤(1)中所提取基因组DNA为模板，利用权利要求1所述分子标记的引物对进行PCR扩增；(3)对步骤(2)中的扩增产物进行酶切处理，之后进行电泳检测；(4)根据步骤(3)的电泳条带结果进行判定，具体标准为：如果酶切产物为长度308bp的特征条带，该待测桃为蔷薇型，如果酶切扩增产物为282bp的特征条带，该待测桃为纯合铃型，如果酶切产物为两条长度分别为308bp、282bp的特征条带，该待测桃为杂合铃型。7.用于检测dCAPs分子标记是否存在的试剂在桃花型基因定位中的应用，其特征在于，扩增所述标记的引物对的上游引物序列如SEQ.ID.NO.1所示，下游引物序列如SEQ.ID.NO.2所示。2CN115141894A说明书1/7页一种鉴定桃花型性状的dCAPs分子标记及其应用技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鉴定桃花型性状的dCAPs分子标记及其应用。背景技术[0002]桃(Prunuspersica)属于蔷薇科(Rosaceae)李属(Prunus)，不仅果实营养丰富，还具有重要的观赏价值。桃花型分为铃形(Non‑showy)和蔷薇形(Showy)，受一对等位基因SH/sh控制，铃形(SH)对蔷薇形(sh)为显性。位于Chr8上的PpB3‑1基因是花型的候选基因，参与花瓣发育，促进花瓣增大，PpB3‑1启动子区域的SNP与桃的花型性状高度相关。[0003]马瑞娟等对507个栽培桃资源花型进行调查分析，发现铃型花资源79个，占15.6％，蔷薇型花资源428个，占比84.4％，说明栽培桃品种以蔷薇型花为主。Chaparro等通过9个F2分离群体对桃花型性状的遗传规律进行分析，F2后代中铃型花与蔷薇型花的分离比为3∶1，符合孟德尔遗传规律，为质量性状。Fan等将该性状作为一个形态学标记锁定在桃第8号连锁群上，位于标记CPPT006与PacC13之间。Micheletti等对1580份桃种质资源进行GWAS分析，发现位于第8号连锁群上有18个SNP标记与花型性状紧密相关，范围为4.3Mb。随后Cao等利用GWAS分析发现位于第8号连锁群13,740,117bp处存在一个与花型性状关联度较高的SNP位点。本团队对‘黄水蜜’(sh)和‘中油桃14号’(SH)F1杂交群体后代进行GWAS分析，发现位于PpB3‑1基因启动子区域的一个SNP关联度最高，并通过测序发现该SNP位点与花型性状共分离，且PpB3‑1(Pp08G015510)基因在不