淀粉酶活性测定.doc

淀粉酶活力测定及性质研究
佟玥姗
（东北农业大学，生命科学学院，生物科学，黑龙江省，哈尔滨市，150030）
摘要：本文以小麦为原料进行试验，分别采用凝胶扩散法，3,5—二硝基水杨酸比色法测定小麦α—淀粉酶活性和总酶活性。首先，制作麦芽糖标准曲线，提取淀粉酶粗酶液，从温度、PH、激活剂及抑制剂对淀粉酶活性的影响。然后，通过剩余淀粉的含量判断淀粉酶水解效果，淀粉遇碘变蓝，颜色越深，淀粉含量高，淀粉酶活性越低。结果表明，40℃时酶活性最佳，PH=5.6是淀粉酶最适温度，氯离子是淀粉酶的激活剂，铜离子是淀粉酶的抑制剂。
Takingwheatasrawmaterialtotestandgeldiffusionmethodwereusedrespectively,3,5-2nitrosalicylicacidcolorimetricmethodtodeterminethewheata-amylaseactivityandtotalenzymeactivity.First,theproductionofmaltosestandardcurve,extractingamylasethickenzymefluid,fromtemperature,PH,theinfluenceofactivatorandinhibitorontheamylaseactivity.Then,bythecontentofresidualstarchamylasehydrolysiseffect,starchiodineblueincolor,highstarchcontent,thelowertheamylaseactivity.Theresultsshowedthattheactivityof40℃best,PH=5.6istheoptimumtemperatureforamylase,chlorideionistheactivatorofamylase,copperionisamylaseinhibitors.
关键词：淀粉酶活性；最适PH，最适温度；激活剂及抑制剂‘
引言：
小麦是我国乃至全世界的主要粮食作物之一,其种植历史长、范围广,因而对于小麦品质的
研究具有广泛的意义。在小麦的收获季节,遇到连绵阴雨天,就会出现大量的穗上发芽的现象,使小麦的品质严重下降,明显降低小麦的食用品质和工艺品质.据报道,加拿大年产小麦约2500万t.。芽麦率严重时可达15%,澳大利亚也有相似的芽麦率,欧洲几乎每年的芽麦率都相当高。在我国也经常出现这种情况a-淀粉酶只有在小麦发芽时才能大量产生。正常情况下,小麦籽粒中缺少a-淀粉酶,a-淀粉酶的活性与发芽时的温度、发芽时间存在着密切的关系。同时发芽小麦中由于a-淀粉酶活性很高,淀粉便会在a-淀粉酶的作用下分解成小分子,再进一步水解成糖类,所以低分子糖类含量也相应较高。本课题研究淀粉酶活性受温度，PH值，激活剂及抑制剂的影响。【1】
1实验材料与方法
1．1材料
小麦（TriticumaestivumL.）、电子天平、研钵、容量瓶、量筒、刻度试管、试管、移液管、离心机、离心管、恒温水浴锅（40度、100度）、分光光度计、1％淀粉溶液、0.4mol/LNaOH、pH=3.0、5.6、8.0的柠檬酸缓冲液
1.2方法

1.2.1麦芽糖标准曲线的制作
取7支干净的具塞刻度试管，分别编号1、2、3、4、5、6、7。依次分别加入麦芽糖标准液0mL、0.2mL、0.6mL、1.0mL、1.4mL、1.8mL、2.0mL，蒸馏水2.0mL、1.8mL、1.4mL、1.0mL、0.6mL、0.2mL、0mL，3,5-二硝基水杨酸各2.0mL。（麦芽糖含量依次为0mg、0.2mg、0.6mg、1.0mg、1.4mg、1.8mg、2.0mg）药品加好后摇匀，置于水浴中煮沸5min，取出后流水冷却，加蒸馏水定容至25mL，以1号管作空白调零点在520nm波长下比色测定光密度，以麦芽糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。

1.2.2淀粉酶粗酶液的提取
称取0.5克萌发的小麦种子（芽长1cm左右）至研钵中加1g石英砂，研磨成匀浆，倒入25ml具塞刻度的试管中，用蒸馏水稀释至刻度线处，混匀后在室温（20℃）下静置，每隔数分钟震荡一次，放置5分钟后，开始离心（4000r/min）10分钟，取上清液备用。

1.2.3温度对酶活性影响
准备8支试管分别编号A、a、B、b、C、c、D、d，分别在A、B、C、D管中加入PH=5.6的缓冲液柠檬酸1ml，淀粉溶液2.5ml;在a、b、c、d管中加入淀粉酶提取液1ml，分别把A、a管放在4℃冷冻箱中,把B、b管放在室温下,把C、c管放在40℃水浴中,把D、d管放在沸水浴中,10min钟后把A管中的溶液倒入a管