微生物检测方法.doc

-1992、FDA《细菌分析手册―需氧菌平板计数》，或15～300个（如ISO4833:1991《微生物学大肠杆菌菌落计数通用指南最大可能数技术》）等。
菌落计数前先观测菌落生长的情况，一般同一稀释度的平板上的菌落数应相近，不同稀释度平板上的菌落数则应与稀释倍数成反比。蔓延菌落的生长会抑制其他菌株的生长，或者会覆盖其他的小菌落，所以最好不要选择有蔓延菌落生长的平板作为计数平板，但如必须选择，应在记录中标记清楚。如片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界限），若只有一条链可视为一个菌落，如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。当每个稀释度制备了两块平板时，用所选择的平板的算术平均值来计算原始样品中的微生物的含量。样品的菌落数等于每克或每毫升的cfu值除以稀释度。
报告方式：
空白对照实验：
2.2大肠菌群
大肠菌群或称总大肠菌群是指一群能在37℃条件下发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。符合这些条件的肠杆菌科细菌主要包括4个菌属：
埃希氏菌属，在此菌属中与人类生活密切相关的仅有一个种，
即大肠杆菌；
其次有柠檬酸杆菌属，其代表种有弗劳地枸橼酸杆菌；
克雷伯氏菌属，代表种为肺炎克雷伯氏菌；
肠杆菌属，代表种有阴沟杆菌和产气杆菌。
大肠菌群卫生学意义：
大肠菌群主要来源于人、畜粪便。大肠菌群是反映食品中是否存在粪便污染的指示菌，食品中有粪便污染，则可推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，同时也反映出被测食品对人体健康存在危害。大肠菌群检测已被广泛应用于食品卫生工作中。
检验的标准通常使用GB/T4789.3-2003、SN0168-92
检验中需了解和注意事项：
1.挑选菌落
在实际工作中，为了提高大肠菌群的检出率，应当熟悉大肠菌群的菌落色泽和形态。在GB/T4789.3-2003检验方法中规定伊红美蓝平板为分离培养基，在该平板上，大肠菌群菌落呈黑紫色有光泽或无光泽，检出率为最高；红色、粉色菌落检出率较低。
2.发酵管的产气量
在日常工作中，有时在发酵倒管内有极微小的气泡（有时比小米粒还小），有时可遇到在初发酵时产酸未产气，但在液面及管壁却可以看到缓缓上浮的小气泡。这种情况大肠菌群的阳性检出率能达到30%-50%。所以不能忽视产气量少的，对未产气的乳糖发酵管如有疑问时，可以用手轻轻打动试管，如有气泡沿管壁上浮，即应考虑可能
有气体产生，而应作进一步试验。
3.抑菌剂
大肠菌群检验中常用的抑菌剂有胆盐、十二烷基硫酸钠、煌绿、龙胆紫、孔雀绿等。抑菌剂可抑制样品中的—些杂菌，特别是G+的生长，而有利于大肠菌群的生长和挑选。
GB/T4789.3-2003中乳糖胆盐发酵管利用胆盐作为抑菌剂，SN0168-92中LST肉汤利用十二烷基硫酸钠（月桂基）作为抑菌剂，BGLB肉汤利用煌绿和胆盐作为抑菌剂。
2.3金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、土壤、水、饲料、食品、灰尘及人和动物的排泄物中都可以存在。因此，食品受污染的机会很多，是引起食品污染和细菌性食物中毒的一种重要细菌。由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒已成为世界性的卫生问题。
一.生物学特性：
1.G+、需氧或兼性厌氧，通常在肉浸液肉汤及肉浸液琼脂或加入血液的培养基上生长良好。
2.耐盐性强。10%-15%的氯化钠培养基中能生长。
3.在血琼脂上，几乎所有的葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素（一种或一种以上）。多数致病菌株可产生透明溶血环，菌落呈金黄色，有时也为白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血圈。
4.葡萄球菌是无芽胞菌中抵抗力最强者，耐干燥可达数月，加
热80℃30min才被杀死。5％石炭酸，0.1%升汞10～15min
死亡。l:100000～200000龙胆紫溶液能抑制其生长。对磺胺增
效剂、青霉素、红霉素等较敏感，但耐药菌株逐年增多。
葡萄球菌肠毒素具有耐热性，加热100℃30min不被破坏.
要使其完全破坏需煮沸2h，这是葡萄球菌肠毒素的特点
二.毒素和酶
金黄色葡萄球菌的致病力决定于细菌产生的毒素和酶的能力。致
病性菌株产生的毒素和酶主要有下列几种：
1．血浆凝固酶：此酶由金黄色葡萄球菌产生，能使含抗凝剂的
人或兔血浆发生凝固。血浆凝固酶试验是鉴定金黄色葡萄球菌的重要标志。
2．溶血毒素：多数致病性菌株均能产生，包括α、β、γ和
δ溶血素，对人致病主要是α-溶血素。
3．杀白细胞素：能破坏人和家兔的中性粒细胞，抵抗吞噬细胞
的吞噬。
4.肠毒素：分A、B、C、D、E和F六个型别。耐热，100℃
30min不被破坏。金黄色葡萄球菌引起的食物中毒以A型为多见，其次是B、C型。
5．剥