测定的指标和方法3-31.doc

1、总酚含量的测定（FoLin-CiocaLteu试剂刘老师买了，2-3天回来；到时候咱们用点就行了。自己配的话很麻烦）
采用福林-酚法检测提取物的总酚含量
准确吸取0.2ml提取液于10ml试管中，加入1ml1N的福林-酚试剂，摇匀，静置5min，加入4ml饱和的Na2CO3溶液，然后以双蒸水定容至10ml，在室温下避光放置2h，以空白为对照在760nm处测定其吸光值，重复测定3次。总酚含量分别表示为每克中草药粉末干重和提取物干重相当的没食子酸的量（mg）。
没食子酸标准曲线的绘制：精密称取没食子酸标准品10.00mg，以双蒸水溶解并定容至100ml，摇匀，配成浓度为100mg/L的标准品溶液。精密吸取没食子酸标准溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml于10ml试管中，分别加入1ml1N的福林-酚试剂，摇匀，静置5min，加入4ml饱和的Na2CO3溶液，然后以双蒸水定容至10ml，在室温下避光放置2h，以空白为对照在760nm处测定其吸光值。以没食子酸含量（mg）为横坐标，吸光值A760为纵坐标，进行线性回归得标准曲线方程Y=1.0477x+0.0438,R2=0.9964，
FoLin-CiocaLteu试剂的配制（你们也再查查）：将100g钨酸钠(Na2WO4·2H2O),25g钼酸钠(Na2MoO4·2H2O),700mL蒸馏水，50mL85%磷酸及100mL浓盐酸装入带回流装置的2000mL圆底烧瓶中，充分混合，文火缓慢回流10h,在加入150g硫酸锂(Li2SO4),50mL蒸馏水及数滴液溴，然后将烧瓶内溶液开口煮15min，以驱除过量的溴，冷至室温后用容量瓶定容至1000mL，过滤。滤液呈微绿色。
吸取10mL1moL/mL的Na0H溶液，放入100mL锥形瓶内，加入2滴酚酞指示剂，用上述滤液滴定。当溶液的颜色由绿经紫红到紫灰，到突然转变成墨绿色即为滴定终点。根据滴定所用的滤液量计算其酸度(相当于2moL/LHCL溶液)。将滤液稀释到H+浓度为1moL/L，此液即为FoLin酚试剂。将其置于棕色试剂瓶内，保存在冰箱中。用前稀释2倍。（1+1）

福林-酚试剂配置方法：在2L的磨口回流装置内加入钨酸钠（Na2WO4.2H2O）100g，钼酸钠（Na2MO4.2H2O）25克，水700ml，35%磷酸50ml，浓盐酸100ml，文火回流10小时，然后加入硫酸锂50g，水50ml和溴水数滴，摇匀，去除冷凝器，继续煮沸15分钟，以去除多余多余的溴，溶液呈金黄色，冷却后，定容至1000ml，过滤后的滤液即福林-酚试剂（溶剂不应成绿色，否则重配），置于棕色瓶中保存

采用Folin-Ciocalteu方法测定。
以没食子酸为标样，在765nm波长下测定吸光值，由吸光度对浓度进行回归，制作标准曲线，建立回归方程：Y=10.975x+0.0199，相关系数r=0.9993。
取提取液50微升放入试管中,接着加入1.0mLFolin一Cioealteu反应试剂0.8mL7.5%的碳酸钠溶液,混合均匀在30度条件下放置60分钟反应"在分光光度计上765mn测定OD值"用没食子酸(Gallieacid)作标准曲线"

1.多酚类化台物及还原性物质(如抗坏血酸)等分子上有极易氧化的羟基,在碱性条件下能与Folin—Denis试剂反应生成蓝紫色的化合物，可见光范围内有稳定的强烈吸收．一定条件下遵从朗伯-比耳定律.
Folin-Denis试剂,即磷钼钨酸试液,又名佛丹二氏(Folin-Denis)试剂:可取水约350ml，置于圆底烧瓶內，加钨酸鈉50g，磷钼酸12g及磷酸25ml，接以回流冷凝器，煮沸二小時，放冷，加水稀释至500ml，混合均匀，制得，本品应置于密塞玻瓶中于冷暗处保存。
2.Folin-Ciocalteu试剂:并用蒸馏水稀释成1:1;
试剂A1.56g硫酸铜100ml
试剂B2,37g酒石酸钠100ml
试剂C2.0gNaOH+10gNa2CO3500ml
试剂D100mlC+1mlA+1mlB102ml(新鲜配制的碱性铜试剂)
Folin-Ciocalteu试剂还原法测定总多酚,缺点是食物中其他还原性物质如抗坏血酸可能产生干扰.每次用前要新鲜配制

2、黄酮含量测定（周2可以测，药品都有）

见另外一个文件

3、提取物总抗氧化活性评估
采用铁还原/抗氧化能力（Ferricreducing/antioxidantpower，FRAP）分析法。取适量上述样品提取液（必要时稀释），加入1.8mlTPTZ工作液（由0.3moL/L醋酸盐缓冲液25ml、10mmoL/LTPTZ溶液2.5ml、20mmol/LFeCl3溶液2.5ml组成），混匀后37℃反应10min，593nm测定吸光度，以1.