Hb的醋酸纤维薄膜电泳.ppt

血红蛋白醋酸纤维薄膜碱性电泳电泳：
指带电胶体粒子或分子在电场的作用下，作定向移动。由于各种物质分子的等电点不同在同一PＨ环境中所带的电荷各不相同,再由于分子量、分子结构、形状大小各有差异，因此在同一电场中泳动速度也就不一样。一般来说，所带的电荷多而分子量小、形状越接近球形者，泳动速度快，反之则慢。
电泳技术的分类：主要归纳为；3）区域电泳（区带电泳）：即在不同电力条件、支持物上进行直接分离，鉴定生物物质，促使获得各自电荷差异的生物粒子或分子形成各自区域以帯形停留在载体上。如：滤纸、淀粉、琼脂、纤维素、聚丙烯酰胺凝胶等，此类电泳技术分离技巧简便，运用十分广泛。4）免疫电泳：即抗原与抗体在比例合适的琼脂糖载体中相结合的一种电免疫技术，亲和电泳即属此类。。根据缓冲液的性质不同可分为：血红蛋白（Hb)的组成及分类：

血红蛋白（Hb)：由亚铁血红素、珠蛋白组成。每个珠蛋白分子由4条多肽链构成，根据其一级结构的不同可分为α、β、γ、δ四种类型。

正常成人Hb种类：

组成百分含量pI
HbAα2β295~98%6.95
HbA2α2δ22~3%7.38
HbFα2γ2<1%>6.95实验原理(ExperimentalPrinciples)醋酸纤维素薄膜是由纤维素的羧基进行乙酰化后而制成的，浸湿后有巨大的张力和柔韧性，几乎对所有生物活性物质均能通过电泳得到分离。
醋酸纤维素薄膜电泳因设备简单、操作方便、电泳时间短、分辨率高、区带分离清晰、无拖尾、易定量等，已成为临床、实验室首选的方法。
实验材料、主要仪器和试剂（Equipments,MaterialsandAgents）操作步骤（OperatingProcedure）2.制备Hb液：
1）洗涤红细胞：将上述离心管，颠倒混匀5-6次，4000rpm，离心3分钟。弃上清，再加1ml0.9%NaCl悬浮红细胞，相同条件重复离心一次。
2）溶血：向红细胞沉淀中加入蒸馏水1～2滴，摇匀，再加入四氯化碳1滴，振荡混匀，相同条件再离心一次，取上清即得Hb液。
3.电泳
1）膜条准备：
2）点样：取出平衡好的膜条，用滤纸吸去多余的液体，然后平铺,（毛面朝上），用小玻片沾取适量Hb液，按印于点样线上，点样处离膜条边缘1.5cm左右。

3）电泳：在电泳槽内加入缓冲液，膜条点样面向下，上样一端靠近负极，盖严电泳室。通电预电泳5-10min。调节电压为100V，电泳30～40分钟。

4）染色：电泳完毕后关闭电源。将膜条取下，放在丽春红染色液中染色10分钟。

5）漂洗：取出染色膜条，放入漂洗液中漂洗至凝胶背景无色为止。
结果与分析：（ResultsandAnalysis）临床意义血红蛋白病分类发病的分子基础是：
β链基因的一个碱基对GAG变为GTG，致使血红蛋白的β链N端第6位的谷氨酸被缬氨酸取代形成HbS。

2.地中海贫血：
基因突变导致珠蛋白肽链合成缺乏或合成量异常，如α、β地贫。

地中海贫血是由于，珠蛋白基因缺失、突变导致某种珠蛋白链合成障碍，造成α链和β链合成数量不平衡，引起的溶血性贫血。最初发现在地中海地区居住的人群发病率特别高，因而称为地中海贫血。
实际上世界各地都有发生，非洲和东南亚也比较常见。我国东南沿海地区高发。

血红蛋白病特点：
ＨbＡ↓；都表现为低色素性贫血。