实时荧光定量PCR技术 LYZ.pptx

Real-timeqPCR提要PCR,PolymeraseChainReaction,
聚合酶链式反应，聚合酶连锁反应PCR基本原理：Template:DNA模板
Primer:引物
Buffer:反应缓冲液
dNTPmix:脱氧核糖核苷三磷酸
ddH2O:双蒸水
ThermusaquaticusDNApolymerase:耐热DNA聚合酶6PCR反应参数：实时荧光定量PCR技术1.定义2.定量角度比较：荧光PCR和普通PCR技术1/扩增曲线线性扩增曲线呈现“S”型，分为四个阶段：
从PCR反应动力学过程角度，可以视作引物、模板、酶三者的随机碰撞。

基线期：反应初期，模板的量很小，所以三者碰撞的概率接近0；
指数增长期：随着循环数的增加，累积了足够的碰撞后，
反应进入指数扩增（线性增长期）；
平台期：随着引物渐渐消耗，三者的碰撞概率又趋于0，并且伴随着酶反应活性的下降，扩增进入平台期。2/基线3/阈值4/Ct值—扩增曲线分析和起点定量的关键：4.基本原理—定量原理5.基本原理—常用的荧光标记方法1/SYBRGreenI荧光染料SYBRGreenI工作原理2/Taqman水解型杂交探针3/MolecularBeacon分子信标变性时:
产生非特异性的荧光荧光标记荧光信号的产生“实时PCR”指不开盖测定核酸6.主要仪器类型ABIReal-TimePCRInstruments:
http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/zh/CN/adirect/lt?cmd=IVGNcatDisplayCategory&catKey=3001MingzhiL,2013-01-24MingzhiL,2013-01-24Thanksforyourattention！