实验指导(2011版).doc

植物组织培养技术

实验1培养基母液的配制
一、目的
掌握培养基母液的配制方法。
二、原理
配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。以MS培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。
三、实验器具与药品
电子分析天平、扭力天平、烧杯(50mL、100mL、500mL、1000mL)、量筒、(1000mL、100mL、25mL)、容量瓶(1000mL、500mL、100mL)，磨口试剂瓶(500mL、1000mL)、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉(1000W)、冰箱。
配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备（见附表一）。植物生长调节物质有2，4-D，NAA，6-BA等。
四、培养基母液的配制过程
首先，按本书的附表1，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后分别进行药品称取和母液配制。具体操作如下：
(1)MS大量元素母液的配制
按照MS培养基配方的用量扩大20倍，将大量元素配制成20倍的母液。配制时先用量筒量取蒸馏水大约800mL，放人1000mL的烧杯中，依次分别称取药品NH4NO3、KN03、KH2P04、MgS04·7H2O、CaCl2·2H20，按顺序先后倒入烧杯中，用玻璃棒搅动，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入1000mL的容量瓶中，用蒸馏水定容至1000mL，然后，倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名，置于4℃冰箱保存备用。
(2)MS微量元素母液的配制
将MS培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大200倍，用分析天平分别依次称取MnSO4·4H20、ZnSO4·7H20、H3BO3、KI、Na2Mo04·2H2O、CuSO4·5H20、CoCl2·6H20，并用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后容量瓶定容后，装入1000mL的磨口试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名，置于4℃冰箱保存备用。
(3)铁盐母液的配制
在电子天平上准确称取2.78g硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)和3．73g乙二胺四乙酸钠(Na2-EDTA)，分别倒人盛400mL蒸馏水烧杯中，微加热并不断搅拌使之全部溶解。将两种溶液倒人同一个1000mL的容量瓶中，强烈搅拌1分钟后，用蒸馏水定容至1000mL，并倒入棕色磨口试剂瓶中，经室温放置一段时间令其充分反应后，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名，置于4℃冰箱保存备用。如果将新配制的铁盐母液立即放入冰箱中，则会容易形成沉淀。
(4)MS有机母液的配制
将MS培养基配方中有机物用量分别扩大200倍。用电子天平依次称取：肌醇(环己六醇)、盐酸硫胺素(维生素B1)、烟酸、甘氨酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)，用蒸馏水依次溶解并定容后，装入500mL的磨口试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名，置于4℃冰箱保存备。
(5)植物生长物质母液的配制
由于水剂型的植物生长物质在组织培养中既使用方便，又消毒简单，故在配制培养基前常将常用的植物生长调节物质，如2，4—D、6-BA和NAA等配制成500mg·L-1浓度的母液。其配制方法如下：
①2，4-D母液；准确称量2，4-D50mg，先用1-3ml90%酒精完全溶解后，加蒸馏水定容；也可以加入少量碱(如1mol．L-1氢氧化钾、氢氧化钠)溶液，使之中和成为钠盐或钾盐，在水中溶解，再加水定容至100mL，即配成浓度为500mg·L-1的母液。贴上标签，注明名称、浓度和配制日期，放在4℃冰箱保存。NAA母液的配制过程与2，4-D相同。
②6-BA母液：准确称量50mg6-BA，加入少量碱溶液(如1mol．L-1氢氧化钾、氢氧化钠)或稀盐酸（1mol．L-1盐酸）溶液使之完全溶解后，加蒸馏水定容到100mL，即配成浓度为500mg·L-1的6-BA母液。转入磨口试剂瓶中，并贴上标签，注明母液名称、浓度和配制日期，放在4℃冰箱保存待用。
五、注意事项
在配制大量元素母液时，混合、溶解各种无机盐时要注意先后顺序，尽量把Ca2+、SO42-和PO43-离子错开分别溶解。同时稀释度要大一些，并要慢慢地边混合边搅拌。
六、实验报告
在实验结果一栏中写出每种试剂的用量

实验2MS培养基的配制与灭菌

一、实验目的
学习用母液法配制MS培养基以及掌握培养基灭菌的方法及操作过程。
二、原理
组织培养所用的培养基含有植物细胞生长所必需的各类营养物质．同时也是各种细菌、真菌滋生繁殖的极