DNA提取方法和步骤专题培训课件.ppt

DNA提取方法和步骤实验原理核酸的理化性质

RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。

DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。

天然状态的DNA是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核中。要从细胞中提取DNA时，先把DNP抽提出来，再把蛋白质和糖去除，同时除去RNA及无机离子等，从中分离DNA。
核酸的提取方法

提取植物DNA的方法主要采用SDS和CTAB法，对它们进行稍加修改就可以应用于DNA的微量提取。两种方法均采用去污剂裂解细胞并保护DNA不受内源核酸内切酶降解。

具体方法简单说来就是利用液氮对植物组织进行研磨，从而破碎细胞。细胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉淀下来。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液经乙醇沉淀。实验材料和试剂实验仪器实验步骤：

取新鲜叶片约3g,剪碎,加入液氮充分研磨后转移至2ml离心管中；
2.在65℃预热的提取液中按3.8g/L加入NaBisufite,混匀并调pH至8.0；
3.在管中加入适量提取液，60℃水浴保温约30min，不时颠倒混匀；
4.冷却至室温后加入等体积氯仿/异戊醇，用力摇匀后，放置摇床上摇动15min左右；
5.室温下10000rpm离心15min，小心吸上清于新的离心管中，加入两倍体积的冷酒精，-20℃放置1h或过夜；
6.挑出DNA置于新的管中，挑出有困难时可以低速离心后倒去上清。加入适量70%酒精，摇动洗涤10min，重复洗涤2-3次；
7.吹干DNA，加入适量TE在65℃溶解，完全溶解后离心去除杂质；
加入RNase（10mg/mL）,室温处理0.5-1h,除去RNA，4℃或-20℃贮存。
如需纯化DNA，再加入适量TE，氯仿/异戊醇多次抽提后吸取上清，加入3ml/LNaAc和两倍体积的乙醇，-20℃放置1h或过夜；
吹干沉淀后，加入适量TE，65℃溶解，4℃或-20℃贮存。1.植物叶子约3g,剪碎置预冷研钵中3.60℃水浴保温30-60min加入等体积氯仿，用力摇匀6.再次10000rpm离心5min；将上清小心吸入新的离心管中；DNA样品在1%Agarose胶上电泳（例图）实验注意事项