分离以尿素为氮源的微生物.ppt

实验2

分离以尿素为氮源的微生物1、尿素分离以尿素为氮源的微生物实验室中微生物的筛选原理：15.0g培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。15.0g用琼脂糖代替琼脂作为微生物培养基的固化剂.

尽可能使培养基中只含尿素一种含氮化合
物，以防止琼脂中的含氮化合物被以尿素为氮
源的细菌利用，有利于对这类细菌的筛选。
15.0g怎样证明此培养基具有选择性呢？选择培养基分离土壤中分解尿素的微生物并计数稀释涂布平板法

原理：

将样品进行稀释，在稀释度足够高时，

微生物在固体培养基上能形成单个菌落。

所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成

的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。实验的具体操作
㈠.土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先灭菌好的信封中。
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。
㈡.制备培养基：
制备以尿素为唯一氮源的选择性培养基。
制备基础培养基。◆应在火焰旁称取土壤10g。
◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行注意事项
①为使结果接近真实值将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。

②为了保证结果准确，一般选择菌落数在30—300的平板上进行计数。如果得到了2个或2个以上菌落数目在30—300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。

③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。◆分离不同的微生物采用不同的稀释度实验中提供的选择培养基的配方中，尿素是培养基中的惟一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能够在选择培养基上生长的微生物不一定是所需要的微生物，还需要进一步的验证。
在实验中，酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中，其变色范围是pH6.4～8.2，在酸性情况下呈黄色，碱性情况下呈红色，这种添加了酸碱指示剂的培养既可以鉴别和分离出能够产生脲酶分解尿素的微生物，称为鉴别培养基。

15.0g选择培养基在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，培养基中将出现红色环带的菌落，说明该细菌能够分解尿素。大肠杆菌呈黑色中心,有或无金属光泽显微镜直接计数：显微镜直接计数：设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌
落数目的实验时，A同学从对应的106
倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌
落，但是其他同学在同样的稀释度下
只选择出大约50个菌落。分析其原因。小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。结果分析与评价
1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。
2.提示：选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。六、例题解析例2．在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最激烈的时期是
A．调整期B．对数期
C．稳定期D．衰亡期1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（）
A.在液体培养基上进行B.至少接种一种细菌
C.接种一个细菌D.及时补充消耗的营养物质
2.使用选择培养基的目的是（）
A.培养细菌
B.培养真菌
C.使需要的微生物大量繁殖
D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别
3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是()
A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3
C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素4.下列说法不正确的是（）
A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶
B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值
C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度
D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。

5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）
A.较多的氮源物质B.较多的碳源物质
C.青霉素类药物D.高浓度食盐例3．（2005年江苏）抗生素作为治疗细菌感染的药物，其高效性和巨大的经济价值使抗生素工业经久不衰。其中青霉素的发现和应用具有划时代的意义。
⑴青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代