枸杞多糖提取基本工艺比较及体外抗氧化性研究应用.pdf

不同工艺枸杞多糖提取率比较及其体外抗氧化性研究

枸杞多糖是一种优质水溶性植物多糖，提取自宁夏枸杞果实。当代药理研究已表白，枸

杞多糖可以改进老年人易疲劳、食欲不振、视力模糊等症状，同步还是枸杞子中调节人体免

疫、延缓衰老重要活性成分。

枸杞多糖作为西安源森生物公司主打产品，已被广泛应用于食品饮料以及保健品领域。

为向客户提供更高品质产品，日前，西安源森生物实验室就枸杞多糖不同提取工艺进行对比

研究，并对枸杞多糖体外抗氧化性进行了测定。

实验概述：1.西安源森生物实验室分别用三种提取办法：浸泡提取法、超声波提取

法和微波提取法提取枸杞多糖；然后采用硫酸-苯酚法对多糖含量进行定性定量分析，得

出不同提取办法所得枸杞多糖含量及提取率；

2.依照枸杞粗多糖对自由基清除率以及对超氧阴离子清除作用测定，比较同浓度条件

下VC与枸杞多糖对抗氧化活性。枸杞多糖体外抗氧化性结论。

一、三种提取办法提取枸杞多糖提取率研究

（一）实验材料与试剂

1.材料

宁夏枸杞西安源森生物实验室自产地直接采购；

2.试剂

（1）5%苯酚；

（2）8mmol/LHCl；25mmol/L邻苯三酚溶液；

（3）0.05mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.2)；10%三氯乙酸；

（4）邻苯三酚(焦性没食子酸，分析纯)；

（5）三羟基甲基氨基甲烷(Tris)(分析纯)；

（6）1,1-二苯基-2-苦基苯肼(1,1-dipheny1-2-picryl-hydrazyl，DPPH)。

（二）仪器与设备
（1）索氏提取装置，HH-S数显恒温水浴锅；

（2）YHW-102型远红外干燥箱；

（3）KQ3200型超声波清洗仪；

（4）WFJ-7200型可见光分光光度计；

（5）LDZ5-2低速自动平衡离心机；

（6）WP700型微波炉；

（7）TU-1900双光束紫外可见分光光度计；

（8）DL-1万用电炉规格(单联电压220V，功率：LX/KW)；

（9）ZDHW型调温电热套(规格250ml，功率150W)；

（10）JA型电子天平。

（三）实验环节

1.枸杞预解决

将宁夏枸杞放于60℃恒温箱中恒温干燥24h→称量→剪碎→回流脱脂（回流两次，每次3h）

→弃去溶剂，残渣风干，残渣即为通过预解决枸杞。

2.运用三种办法进行枸杞多糖提取

（1）浸泡法提枸杞多糖

用电子天平称取等量经预解决后枸杞，浸泡3h，然后用90℃水浴提取1.5h，用脱脂棉

过滤，重复提取3次，弃去残渣，合并滤液，浓缩，离心(3000r/min，30min)，弃去残渣，

上清液为多糖溶液。

（2）超声波法提取枸杞多糖

用电子天平称取等量经预解决后枸杞，置超声波清洗仪中，40℃恒温超声波提取1h，脱

脂棉过滤，重复提取3次，弃去残渣，合并滤液，浓缩，离心(3000r/min，30min)，弃去残

渣，上清液为多糖溶液。

（3）微波法提取枸杞多糖

用电子天平称取等量经预解决后枸杞，置于微波炉中加热提取20min，脱脂棉过滤，
重复提取3次，弃去残渣，合并滤液，浓缩，离心(3000r/min，30min)，弃去残渣，上清液

为多糖溶液。

3.三氯乙酸法去除蛋白质

在枸杞多糖水溶液中加入10%三氯乙酸，调节pH至3，在10℃条件下放置过夜，离

心(3000r/min，30min)，弃去沉淀，即得无蛋白质多糖溶液（待测样品溶液）。

4.枸杞多糖沉淀

向除去蛋白质枸杞多糖溶液中加入4倍体积95%乙醇沉淀，静置24h，离心(3000r/min，

30min)，弃去上清夜，固态物用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚依次进行洗涤，颜色分

别由黄色洗至近无色，后置于60℃恒温干燥24h，即为枸杞多糖粗品。

5.多糖再沉淀

将枸杞多糖粗品溶于热水中使其完全溶解，过滤弃去沉淀，浓缩溶液，向枸杞多糖溶液中

加入4倍体积95%乙醇沉淀，静置24h。离心(3000r/min，30min)，弃去上清液，固态物用

95%乙醇、无水乙醇、丙酮和乙醚依次进行洗涤，颜色洗至近无色，于60℃恒温干燥24

h，即为枸杞多糖。

（四）原则曲线绘制

1.葡萄糖原则溶液配制

2.原则曲线绘制

编号为1、2、3、4、5、6具塞试管中为精准量取原则溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、

1.0ml。其中，1号试管为空白对照溶液。

试管中分别加水至2.0ml，分别精准加入5%苯酚溶液1.0ml（摇匀）→迅速加入浓硫酸

5.0ml（摇匀）→放置10min→置40℃水浴中保温15min→取出后迅速冷却至室温。

用紫外-可见分光光度法在490nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，葡萄糖浓度

为横坐标，绘制原则曲线，得线性回