表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组鸭瘟病毒的构建的任务书.docx

表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组鸭瘟病毒的构建的任务书
任务书
题目：表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组鸭瘟病毒的构建
背景和意义：
禽流感是家禽中较为常见的病毒性传染病之一，是由禽流感病毒引起的，其症状包括高热、咳嗽、呼吸急促、乏力等。其中，H5N1亚型禽流感病毒对多种离化形病毒表现出高度的感染力。而鸭瘟病毒则是一种鸟类病毒，同样具有高度传染性和致死率，对于禽类养殖业来说是亟待解决的重要问题。
基于病毒重组技术，将H5N1亚型禽流感病毒的HA基因重组到鸭瘟病毒中，既可以降低H5N1亚型禽流感病毒对离化形病毒的致病性，同时也可以提高鸭瘟病毒的抗原性和生物安全性，为禽类疫病防控提供新的原料和思路。
任务要求：
1.提取H5N1亚型禽流感病毒中的HA基因，通过基因克隆技术放置到鸭瘟病毒基因组中。
2.通过PCR方法进行HA基因的扩增和纯化，形成重组质粒。
3.将重组质粒导入细胞中，利用细胞表达技术，在细胞内表达重组蛋白，并检测表达效果。
4.通过SDS-PAGE和Westernblot，验证重组蛋白的表达和纯化情况。
5.通过动物实验检测重组病毒的致病性和免疫性，并比较与H5N1亚型禽流感病毒和鸭瘟病毒的差异。
步骤和计划：
1.提取H5N1亚型禽流感病毒中的HA基因(2周)
1.1筛选合适的H5N1亚型禽流感病毒样本
1.2利用基因克隆技术提取HA基因
2.重组质粒的构建(2周)
2.1通过PCR方法进行HA基因的扩增和纯化
2.2放置到鸭瘟病毒基因组中
3.表达重组蛋白(2周)
3.1将重组质粒导入细胞中
3.2利用细胞表达技术，在细胞内表达重组蛋白
4.验证重组蛋白的表达和纯化情况(2周)
4.1通过SDS-PAGE和Westernblot，验证重组蛋白的表达和纯化情况
5.动物实验(4周)
5.1通过动物实验检测重组病毒的致病性
5.2比较与H5N1亚型禽流感病毒和鸭瘟病毒的差异
预计时间：10周
成果目标：
1.成功构建表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组鸭瘟病毒的系统。
2.验证表达效果和纯化情况，以及通过动物实验检测重组病毒的致病性和免疫性，并比较与H5N1亚型禽流感病毒和鸭瘟病毒的差异。
3.为禽类疾病的防治提供重要资料，为农业生产提供支持。
参考文献：
1.Zhu,Z.,Yang,F.,Yang,Y.,Liu,H.,Zhang,K.,&Niu,X.etal.(2008).RecombinantNewcastlediseasevirusexpressingH9subtypehemagglutiningeneofinfluenzavirusprotectschickensagainstNewcastlediseaseandavianinfluenza.Vaccine,26(33),4242-4251.
2.Jeong,O.M.,Kim,M.C.,Kang,H.M.,Lee,Y.J.,Youn,H.N.,&Kim,J.H.etal.(2009).ExperimentalassessmentofthepathogenicityofH6N1influenzavirusinchickens,ducks,andquails.ArchivesOfVirology,154(4),703-708.