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PTEN对胰岛素抵抗的骨骼肌细胞调亡的影响及吡格列酮的干预研究
摘要
胰岛素抵抗是2型糖尿病的一个重要症状，也会导致骨骼肌细胞的凋亡，致使肌肉组织的质量下降。本研究探究了PTEN在胰岛素抵抗骨骼肌细胞中的作用，并研究了吡格列酮对其有无干预的作用。结果显示，PTEN表达量显著升高，同时伴随着细胞凋亡率增加。吡格列酮可以显著降低PTEN的表达量，同时减少细胞凋亡率，说明吡格列酮可以在胰岛素抵抗的背景下干预骨骼肌细胞的凋亡，可能具有预防和治疗2型糖尿病的潜力。
关键词：PTEN、胰岛素抵抗、骨骼肌细胞、凋亡、吡格列酮、2型糖尿病
Introduction
胰岛素抵抗是2型糖尿病发展的重要症状之一，在2型糖尿病患者中普遍存在。研究表明，胰岛素抵抗可以导致骨骼肌细胞凋亡，进而导致肌肉组织质量下降。因此，研究骨骼肌细胞凋亡的机制及其干预具有重要临床意义。
PTEN是一种脂质磷酸酶，主要负责负调控PI3K/Akt信号通路。之前的研究表明，PTEN在2型糖尿病发病中扮演着重要的角色。然而，对于胰岛素抵抗的骨骼肌细胞，PTEN的作用尚不清楚。
吡格列酮是一种口服降糖药物，主要通过抑制肝脏中糖原酶的活性来降低血糖，此外还具有一定对胰岛素抵抗的修正作用。本研究旨在探究吡格列酮是否能在胰岛素抵抗的骨骼肌细胞中干预PTEN的表达，从而影响细胞的凋亡率。
Materialsandmethods
实验设计
该研究采用随机对照实验设计，将大鼠骨骼肌细胞分为对照组、胰岛素抵抗组和吡格列酮处理组三组。
实验材料
大鼠骨骼肌细胞、胰岛素、吡格列酮，AnnexinV-FITC/PI双染法检测试剂盒，MMP-3、Bax、Bcl-2、PTEN和β-actin抗体等。
操作步骤
1.骨骼肌细胞培养
将雄性Wistar大鼠半肌腹肌组织细胞培养于10%FBS的DMEM中，孵育于37℃，5%CO2中。更换完全培养基直到细胞收集。
2.建立胰岛素抵抗模型
将骨骼肌细胞分为对照组和胰岛素抵抗组，胰岛素抵抗组细胞加入胰岛素（10^-6mol/L）8小时，对照组不加胰岛素。
3.吡格列酮处理
将骨骼肌细胞分为对照组、胰岛素抵抗组和吡格列酮处理组，其中吡格列酮处理组加入吡格列酮（10^-5mol/L）1小时，并在胰岛素预处理后1小时加入。
4.细胞凋亡测定
采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测试剂盒测定细胞凋亡率。
5.蛋白质抽提和Westernblot分析
通过Westernblot分析检测PTEN、Bax、Bcl-2和MMP-3蛋白水平。
Results
PTEN在胰岛素抵抗的骨骼肌细胞中表达量明显升高，Bax和MMP-3的表达量亦显著升高，而Bcl-2的表达量下降。此外，胰岛素抵抗组的细胞凋亡率明显升高。吡格列酮可以显著降低PTEN的表达量，同时减少Bax和MMP-3的表达，增加Bcl-2表达，降低细胞凋亡率。
Conclusion
本研究证明PTEN在胰岛素抵抗的骨骼肌细胞中扮演着重要的角色，并且吡格列酮能够降低PTEN的表达量，减少细胞凋亡率，具有在胰岛素抵抗的背景下干预骨骼肌细胞的凋亡的潜力。
Keywords:PTEN,Insulinresistance,Skeletalmusclecells,Apoptosis,Pioglitazone,Type2diabetes