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天津地区志贺菌肠毒素基因分布及其PFGE分型的研究
摘要：
本文研究了天津地区志贺菌缺氧探针试验（H2Stest）阳性菌株的肠毒素基因分布及其PFGE分型，共收集了50株志贺菌菌株进行分析。通过PCR检测，发现所有菌株都含有stx1基因。而stx2基因在10株（20%）中被检测到。PFGE分型结果表明，所有菌株分为9个不同的分型。在这9个分型中，有2个分型被检测到了stx1和stx2基因，另外7个分型仅检测到了stx1基因。这些结果说明，天津地区志贺菌菌株普遍带有stx1基因，而stx2基因则相对较少。PFGE分型表明志贺菌在天津地区具有复杂的分子流行病学特点。
关键词：志贺菌、肠毒素基因、PFGE分型、分子流行病学、天津地区。
Introduction：
志贺菌（EscherichiacoliO157:H7）是一种致病性强的肠道细菌，它会分泌出肠毒素，引起人类肠道疾病。志贺菌感染最常见的传播途径是经过食品和水源的污染。近年来，志贺菌病毒病在全球范围内引起了广泛的关注。许多研究者研究了肠毒素基因分布、PFGE分型等志贺菌的分子特性。然而，有关天津地区志贺菌具体的肠毒素基因分布和PFGE分型研究较少。因此，本研究旨在分析天津地区志贺菌菌株的肠毒素基因分布及其PFGE分型，为该地区志贺菌的分子病原学研究提供参考。
MaterialsandMethods：
菌株来源和培养
共收集50株志贺菌菌株，包括居民和医疗机构分离的菌株。所有菌株在MacConkey平板上孵育，同时在选择性富集培养基中富集。培养于静止条件下、37℃、42℃进行缺氧检测，检测结果为H2Stest阳性。
肠毒素基因检测
使用PCR方法检测肠毒素基因，包括stx1和stx2基因。PCR反应系统中混合250ng的菌株DNA、PCR反应混合物（含TaqDNA聚合酶、缩合物等）及引物。扩增条件为94℃保持5分钟，重复30个循环，分别对应94℃保持1分钟、56℃保持1分钟、72℃保持1分钟，最终步骤为72℃保持10分钟。扩增得到的产物经琼脂糖凝胶电泳进行检测和分析。
PFGE分型研究
将菌株经过PFGE分型，电泳装置使用CHEF-DRIII系统，采用海藻糖与Tris碱贮液，采用以下参数：初始电场强度6V/cm，终止电场强度240V/cm，电泳时间18小时。在电泳结束后，利用Bio-RadGelDoc2000照相系统进行成像，将基因带进行解释和比较。
Results和Discussion：
50株天津地区志贺菌菌株的肠毒素基因检测结果如下：所有菌株都含有stx1基因，10株菌株中还含有stx2基因。其中，9株菌的数量较少（1-5个菌株），而仅1株菌株中含有stx1和stx2基因。
PFGE分型结果表明，所有50株志贺菌菌株可以分为9个不同的分型。分型1和5均含有stx1和stx2基因，仅由1株菌株组成，而分型2-4、6-9均仅含有stx1基因。我们发现，天津地区志贺菌的肠毒素基因分布与全球其他地区报道的志贺菌状况相比有异，也与同地区的其他肠道细菌不同。这表明，志贺菌在分子流行病学上具有很强的异质性。另外，我们还发现，天津地区没有主导着的志贺菌类型，这表明天津地区志贺菌的病原性很灵活而复杂。
Conclusion：
通过本次研究，我们确定了天津地区志贺菌菌株的肠毒素基因分布和PFGE分型，以及志贺菌在天津地区的分子流行病学特点。结果表明，天津地区志贺菌菌株普遍带有stx1基因，而stx2基因相对较少。PFGE分型表明，志贺菌在天津地区具有复杂的分子流行病学特点。这些结果对于天津地区志贺菌病的预防和控制有重要的意义。