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CD44与ALDH1真核双表达质粒构建和体外表达
CD44和ALDH1是干细胞表面标记和降解代谢酶，其中CD44通过对基质分子作用，维持细胞黏附，控制细胞增殖、存活和迁移功能。而ALDH1作为干细胞中的代谢酶，参与多种生化反应，催化细胞内氧化物的代谢，维持细胞的稳态和细胞凋亡的平衡。这两个蛋白质的高表达与多种肿瘤的发生、发展和复发紧密相关，因此对其调节代谢途径和表达水平的研究非常迫切。
基因如何在细胞中表达，这关键是由双链DNA模板生成mRNA，后者进一步被翻译成多肽或蛋白并参与生物学过程。在现代生命科学中，表达质粒是重要的实验工具之一，经过改造和构建，可以在细胞体内或体外表达不同的外源蛋白质。因此，我们设计了CD44和ALDH1真核双表达质粒并检测了其在体外表达情况。
CD44和ALDH1的cDNA序列被测定并在原始质粒载体中放置，进一步连入真核表达元件、抗生素筛选序列和标签等序列。该双表达质粒在Escherichiacoli菌株中扩增纯化，并按照细胞转染的标准程序，导入人类肾脏上皮细胞系（293T）中进行体外表达。我们采用荧光显微镜观察转染细胞的表型，用SDS-PAGE和Westernblot分析表达蛋白的相对分子质量和定量表达水平，并运用荧光素酶报告基因检测细胞凋亡情况。
实验结果表明，CD44和ALDH1真核双表达质粒的构建成功，能够在293T细胞中表达目的蛋白。通过荧光显微镜观察，明确发现转染细胞中的荧光素酶荧光信号增强，表明外源蛋白的表达是成功的。SDS-PAGE和Westernblot结果显示，转染细胞中出现了CD44和ALDH1的3个条带（等电点约7.0、7.5和8.0），相对分子质量分别为81kDa、74kDa和68kDa，与已知蛋白的理论值相符。而通过荧光素酶报告基因检测，细胞内凋亡比例表现为外源蛋白的调节对细胞生长的影响变化。
综上所述，我们成功地构建了CD44和ALDH1真核双表达质粒并表达于293T细胞系中，表明该质粒可以在细胞体内表达外源蛋白，为深入研究CD44和ALDH1在干细胞和肿瘤进程中的作用提供了实验依据。