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获取动物组织材料冰冻蚀刻大面积复型膜的一种简便、可靠方法
动物组织材料是生命科学研究中不可或缺的实验材料。随着科研技术的不断发展，对组织的研究也越来越深入。在组织样本的表面制备复型膜，是进行扫描电镜（SEM）等显微镜观测的必要步骤。传统的电子显微镜样品制备方法中，蚀刻技术是必不可少的步骤，而冰冻蚀刻技术在取材方便、制备过程可控、膜质量好等方面都占优势。本文将介绍一种简便、可靠的方法，用于获取动物组织材料冰冻蚀刻大面积复型膜。
一、材料
1.动物组织样品
2.水合物
3.冰刀
4.离心机
5.制冰机
6.压克力样品盒
7.快速冷冻机
二、方法
1.制备氢氧化钠（NaOH）水合物
取出适量的NaOH固体，加入适量的去离子水中，搅拌并加热至溶解。等待溶液冷却至室温，可以观察到NaOH水合物缓慢沉淀。倒出上清液，用去离子水反复洗涤沉淀物，直至中性或微弱碱性。此时氢氧化钠水合物已制备完成，可以将其保存在干燥避光的地方。
2.快速冷冻样品
取一定量的动物组织样品，用纸巾吸干表面水分，使其表面干燥。将样品置于压克力样品盒中，滴加少量的NaOH水合物，使其覆盖样品，避免泡沫产生。然后将样品盒迅速放到预先冷却好的制冰机中，使其快速冷冻。
3.制备冰刀
将纯水倒入冰型模具中，冻结并取出。然后在冰块上慢慢滴加适量的NaOH水合物，用手指轻轻划拉，使水和水合物混合。等待冻结，制备的冰块就成了冰刀。
4.切割样品
将快速冷冻的样品抛入液氮中进行冷冻断面的制备，然后将样品切割至所需大小。样品切割时另一头手持冰刀，将冰刀的一侧放在样品的切割平面上，等待冰刀凝固，然后轻轻地削下薄片。此时冰刀的凝固保证了样品表面平整，保证了样品的削减质量。
5.冰冻蚀刻
将切割好的样品，放入离心管中，滴加适量的NaOH水合物，封紧管盖并冰冻在快速冷冻机中。将冰冻好的样品取出，速冻床上，然后进行冰冻蚀刻。在较低的溅射能量下，进行冰冻蚀刻，可以得到清晰的复型膜。最后，取出样品，用1%谷胱甘肽氧还蛋白酶适量洗涤，然后用去离子水冲洗数次，最后用氯化金溶液或浓磷酸等溶液制备。
三、结果
我们采用以上方法，成功地制备出了复型膜样品。整个过程操作简便，易于掌握；同时，样品的制备过程可控，膜质量好，可以满足扫描电镜（SEM）等显微镜观测的要求。
四、结论
通过对动物组织材料的冰冻蚀刻过程研究，我们发现本方法可以有效地减少样品处理过程中的变形和污染，同时制备的复型膜也高质量、高分辨率，能够满足扫描电镜等显微镜学的观察要求。本方法的优点在于：操作简便、方法可靠、样品制备过程可控、膜质量好等等。本方法为动物组织材料冰冻蚀刻大面积复型膜制备提供了一种简便、可靠的方法。
参考文献：
[1]动物组织样品的快速冷冻切片[J].生物物理学报,1995,11(2):133-139.
[2]电子显微镜冰冻切片技术[J].现代生物医学进展,2001,1(3):24-27.
[3]技术探讨:冰冻蚀刻[J].显微大观,2015,61(4):130-132.