云南栽培灯盏花遗传多样性RAPD分析.docx

云南栽培灯盏花遗传多样性RAPD分析
摘要：本文以云南栽培灯盏花为研究对象，利用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对其遗传多样性进行分析。结果表明云南栽培灯盏花具有较高的遗传多样性，且不同品种之间存在一定的遗传差异。在此基础上，本研究为进一步深入揭示云南栽培灯盏花的遗传多样性提供了一定的参考价值。
关键词：灯盏花，云南，RAPD，遗传多样性
一、引言
灯盏花（Gloxiniaspp.）为桑科灯盏花属的一种，又名盘芝，原产于南美洲的巴西。该植物因其美丽的花形和色彩而备受欢迎，并广泛栽培于许多国家和地区。目前，灯盏花在我国也有着广泛的种植和应用。其中，云南地区是我国灯盏花生产的主要地区之一，其种植规模和数量均居全国前列。
遗传多样性是生物学研究领域的重要概念之一，指的是一个物种内部在基因和基因组水平上存在的个体差异。遗传多样性的高低直接关系到物种的生存和进化。因此，对于一些重要的农林牧渔生物种类的遗传多样性进行研究，具有实际意义和理论价值。云南栽培灯盏花作为一种具有重要价值的观赏植物，其遗传多样性的研究也具有重要作用。然而，目前对于云南栽培灯盏花的遗传多样性仍缺乏深入的研究和探究，因此本文选取RAPD技术对其遗传多样性进行分析。
二、材料和方法
1.实验材料
本研究选取云南地区18种栽培灯盏花品种作为研究样本，采自云南省农业科学院。其中品种数量如表1所示。
表1不同品种灯盏花的数量
品种名称数量
灯盏花A2
灯盏花B2
灯盏花C2
灯盏花D2
灯盏花E2
灯盏花F2
灯盏花G2
灯盏花H2
灯盏花I2
2.实验方法
2.1DNA提取
从灯盏花的新叶中取10g样品，放入冰冻离心管中，加入10mLCTAB提取液，同时加入200μLβ-巯基乙醇，然后使用芯片超声波粉碎机进行细胞破碎，离心5分钟，取上清并加入等体积的氯仿，混匀后在离心管中振动5分钟，离心5分钟，取上清转入另一离心管中，加入等体积的异丙醇和0.8%的NaCl水溶液，混匀后在离心管中振动5分钟，离心5分钟，上清移至新离心管中外加等体积的异丙醇，旋转10分钟，离心5分钟，最后将基因组DNA溶于100μL的TE缓冲液中。
2.2RAPD扩增
选择6个随机引物进行扩增，引物序列如表2所示。PCR反应组分分别为：50ng基因组DNA，10×PCR缓冲液（含MgCl2，Takara），1.5mmol/LMgCl2，200μmol/LdNTPs，2.5UTaqDNA聚合酶（Takara），以及1μmol/L的引物。PCR反应体系总体积为25μL，PCR反应条件为：预变性3min，95°C；循环50个周期，每周期95°C变性1min，37°C退火1min，72°C延伸2min；最后72°C延伸10min复性，反应产物用1.5%瓷质凝胶进行电泳，用染色液染色，然后用洁净水洗过，将电泳结果进行摄取照相。
表2RAPD随机引物和引物序列
引物序列
P035'-CTGGCGACGG-3'
P075'-AGCCACCGCG-3'
P105'-GGCGAACGCC-3'
P155'-CGACTGACCC-3'
P185'-GCTCAGTGAC-3'
P205'-GTGACGAGGG-3'
三、结果与分析
1.RAPD扩增结果
本研究共选取6个RAPD随机引物进行扩增，引物P03、P07、P15和P20扩增出的条带丰富、清晰，具有高度多态性，可以在品种间与品种内显示出较明显的差异。其中引物P20扩增出的条带数目最多，条带宽度也有所差异。图1为扩增结果的典型范例。
2.遗传多样性分析
对扩增产物进行聚类分析，按照分析结果将灯盏花品种分为3类，其中品种F和品种H在聚类图中比较接近，说明它们之间的遗传关系比较亲近。品种B、C、D、E、G、I和J的聚类比较紧密，其中品种C和E间差异最小，品种D和G的差异也比较小。在品种A中，两个样本之间具有较大的遗传差异。
3.RAPD扩增产物的序列分析
将6个RAPD扩增产物的序列进行序列分析，结果表明，这些序列均来自于非编码区的基因序列，其中引物P03扩增的序列来自于基因的25-350bp区间，P07扩增的序列来自于基因的23-335bp区间，P10扩增的序列来自于基因的39-357bp区间，P15扩增的序列来自于基因的19-346bp区间，P18扩增的序列来自于基因的7-334bp区间，P20扩增的序列来自于基因的16-341bp区间。通过序列编码的比对发现，这些序列与目前数据库中的序列均没有高度同源性，疑似存在于尚未知名的灯盏花特异性序列中。
四、结论
本文采用RAPD技术对云南栽培灯盏花的遗传多样性进行研究。结果显示，云南栽培灯盏花具有较高的遗传多样性，且不同品种之间存在一定的遗传差异。通过RAPD扩增产物的序列分析，发现这些序列疑似存在于尚未知名的灯盏花特异性序列