麦洼牦牛和九龙牦牛FSHβ基因的PCR-SSCP分析.docx

麦洼牦牛和九龙牦牛FSHβ基因的PCR-SSCP分析
引言:
FSH（follicle-stimulatinghormone）主要作用于卵巢及睾丸中的生殖细胞，是促进卵胞和精子发育的重要激素，对于维持动物繁殖过程中的正常生命活动具有非常重要的作用。麦洼牦牛和九龙牦牛是我国特有的重要畜禽资源，在当今的生态环境下得到了广泛的关注。因此，对于这两个物种FSHβ基因的研究，对于促进我们对于其繁殖过程的了解和有效保护意义重大。本文主要采用PCR-SSCP技术，对麦洼牦牛和九龙牦牛中FSHβ基因形态上的差异进行了研究和分析。
材料与方法：
1、实验材料
本实验采用了2只麦洼牦牛和2只九龙牦牛（均为成年雌性），样本来源于四川省的峨眉山和云南省的九龙，分别存储于−80°C的冰柜中。实验所需试剂包括：DNA提取试剂盒（Takara公司）、PCR反应试剂盒（Takara公司）、聚丙烯酰胺凝胶、1×TAE缓冲液、硼砂缓冲液、SYBRGreen1染料。
2、DNA的提取
本实验采用Takara公司的DNA提取试剂盒，按照说明书进行提取并纯化。
3、PCR实验
本实验采用Takara公司的PCR反应试剂盒，使用FSHβ的上下游引物进行扩增，扩增条件为：94℃预变性10min，38个循环：94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸45s，最后72℃延伸10min。
4、SSCP实验
本实验采用5%聚丙烯酰胺凝胶，1×TAE缓冲液，555nm紫外照射灯，SYBRGreen1染料。将PCR产物与SSCP样品载入电泳槽中，跑电条件如下：250V，30min。在555nm紫外照射灯下，观察PCR产物的形态变化，并用SYBRGreen1染料进行染色，最后观察PCR产物的条带图谱。
结果与讨论:
1、PCR扩增实验
实验成功扩增出了麦洼牦牛和九龙牦牛FSHβ基因的扩增产物，大小分别为432bp和437bp，符合预期结果。
2、SSCP分析实验
经过SSCP分析，两个品种FSHβ基因的SSCP带型存在较大差异。如麦洼牦牛的基因有两个单核态，一个双核态，一个三核态。九龙牦牛的基因有两个单核态，一个双核态。两个品种的SSCP带型在最后缺失的位置也有不同。通过观察条带形态，发现不仅两个品种之间的存在差异，同种物种中也有较大的个体之间存在的结构变异，这一结论也与现有研究相符。
结论:
本文采用PCR-SSCP技术，对于分析了麦洼牦牛和九龙牦牛FSHβ基因结构上的差异。结果表明，两个物种之间有较大的基因型差异，且同一物种之间也存在结构上的个体差异。这一研究的成果为我们深入了解两个物种在繁殖过程中FSHβ基因的作用提供了重要参考。未来，进一步的研究还应该进一步探索这些变异如何影响FSHβ基因的合成、沉积和拆分等过程，以及这种差异如何影响各个物种的繁殖能力等问题。