完整版BCA蛋白浓度测定整理版-豆柴文库

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(完整版)BCA蛋白浓度测定(整理版)
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不得用于商业用途
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BCA蛋白浓度测定
Pierce？BCAProteinAssayKit
(试剂盒室温保存）
1.准备BSA标准品
按Table1配制一系列的蛋白标准品.
原液（stock）：取出一个ample（内含2mg/mL的白蛋白标准品(此量足够3个replication)
2。准备BCA工作液（WorkingReagent,WR)
（1)用公式计算总工作液量
（标准品数+待测样品数)*(复制数）＊(每个工作液的量)=总的需要的工作液的量
例子:3个待测样品,每个样品2个复制所需的工作液量
（9个标准品+3个待测样品)*（2个复制数)*（2ml）=48ml工作液
Note:试管法：每个试管需2ml工作液
微孔板:每个孔需200ul工作液（例子中需共4.8ml)
(2）BCA试剂A:B=50：1配制适量BCA工作液，充分混匀。
对于上面的例子，试管法需要50mlBCAA液+1mlBCAB液,微孔板法需5mlA液和1mlB液.
B液加到A液中时，迅速浑浊，但是通过混匀立即变成清澈绿色的工作液.工作液在密闭室温下可以保存数天.
3。微孔板步骤(样品与工作液比例=1:8)
(1).标准液和样品各25ul加入微孔板中
Note：若样品有限，可各加10ul（样品与工作液比例=1：20）
(2）.每孔加200ul的工作液并且充分震荡30s。
（3）.在37度孵育样品30min，或室温2h。
（4).冷却至室温.
(5).在酶标仪中测量562nm时的吸光值
（6).绘制标准曲线，再用标准曲线判断出样品的蛋白浓度.
Note：540-590nm的波长均可
Figure1：TypicalcolorresponsecurvesforBSAandBGGusingtheStandardTestTubeProtocol(37°C/30-minuteincubation）.

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