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米曲霉产米黑根毛霉脂肪酶高通量筛选方法的建立
标题：米曲霉产米黑根毛霉脂肪酶高通量筛选方法的建立
摘要：
脂肪酶是一类广泛存在于多种生物体中的酶，具有催化酯键水解的能力。本研究的目的是建立一种高通量筛选方法，用于筛选米曲霉产米黑根毛霉脂肪酶活性较高的菌株。首先，利用菌株的筛选培养基对不同的菌株进行筛选，并通过活性测定的方法对所得菌株进行酶活性测试。然后，利用高通量平台对酶活性较高的菌株进行进一步筛选，并通过测定产品水解率和最适温度等指标对酶进行评估。最后，通过对筛选出的菌株进行酶的纯化和酶学性质的研究，对产酶菌株进行进一步的鉴定和分析。
关键词：脂肪酶；高通量筛选；米曲霉；米黑根毛霉
1.引言
脂肪酶是一类广泛存在于真核生物和真细菌中的酶，具有催化酯键水解的能力，广泛应用于食品、医药、油脂等领域中。在米曲霉产米黑根毛霉中存在着脂肪酶，但目前对其酶学性质和筛选方法的研究较少。因此，建立一种高通量筛选方法，用于筛选米黑根毛霉脂肪酶活性较高的菌株，对于深入研究其酶学性质和开发应用具有重要意义。
2.筛选培养基的优化
筛选培养基的选择对于筛选活性较高的菌株至关重要。通过改变培养基的成分、培养条件以及添加特定的诱导物等方法，可以获得不同菌株产酶能力的差异。针对米曲霉产米黑根毛霉脂肪酶的特点，我们设计了一种富含蛋白质、碳源和氮源的筛选培养基，并优化了培养温度、pH值等因素。在此基础上，对米曲霉菌株进行筛选，选取产酶能力较强的菌株进行下一步研究。
3.酶活性测试与高通量筛选
通过对选取的菌株进行酶活性测试，可以评估菌株产酶能力的强弱。我们使用常规的酶活性测定方法，如测定底物水解产物的生成量，来确定菌株的酶活性。根据测试结果，选取酶活性较高的菌株进行高通量筛选。
高通量筛选是一种快速、高效的筛选方法，通过使用自动化设备和高通量平台可以对大量的菌株进行筛选。我们使用高通量平台建立了一个脂肪酶活性筛选的方法，该方法利用微孔板和荧光探针进行筛选，并通过测定荧光强度来评估不同菌株的脂肪酶活性。根据筛选结果，我们可以鉴定和选择出活性较高的菌株。
4.酶学性质的分析
对于筛选出的菌株，我们对其酶学性质进行进一步的研究。首先，通过酶的纯化和分离，可以获取高纯度的酶样品。然后，对酶的催化特性、底物特异性、最适催化条件等进行研究。通过这些研究，我们可以更加深入地了解米曲霉产米黑根毛霉脂肪酶的性质和特点。
结论
本研究以米曲霉为对象，建立了一种高通量筛选方法，用于筛选米黑根毛霉脂肪酶活性较高的菌株。通过对菌株的筛选培养基优化、酶活性测定和高通量筛选，选取了活性较高的菌株，并对其酶学性质进行了初步的研究。该方法为深入研究米曲霉产米黑根毛霉脂肪酶的功能与应用提供了有力的支持。
参考文献：
[1]HongR.,ZhangC.,ZhangF.,etal.(2017).ANovelCold-ActiveLipasefromCandidaalbicans:Cloning,ExpressionandCharacterizationofRecombinantEnzyme.PLoSONE,12(1):e0169724.
[2]GuptaV.K.,KumarR.,KumariA.,etal.(2015).EnhancedproductionandcharacterizationofmultipleformsoflipasefromPenicilliumnotatumbysubmergedfermentationprocess.AnnMicrobiol,66(2):921–927.