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马铃薯中酪氨酸酶的提取及其活性的研究
摘要：
本文研究了马铃薯中酪氨酸酶的提取和其活性。通过对不同条件下马铃薯中酪氨酸酶的提取实验，确定了最适宜的提取条件。得到的酪氨酸酶样品经SDS-PAGE电泳分离和Westernblot检测，确定得到的蛋白质是酪氨酸酶。利用天然的酪氨酸为底物，在一定温度下测定了酪氨酸酶的活性，并探讨了pH值、温度和底物浓度等因素对酪氨酸酶活性的影响。
关键词：马铃薯、酪氨酸酶、提取、活性
马铃薯中酪氨酸酶的提取及其活性的研究
1.引言
酪氨酸酶是一种广泛存在于动植物体内的酶类，在生物学、医学和食品科学等领域均具有重要的应用价值。马铃薯是一种富含酪氨酸酶的植物，其提取和研究对于开发酪氨酸酶的应用具有重要的意义。本文旨在研究马铃薯中酪氨酸酶的提取方法和其活性特征，为其进一步应用提供理论基础。
2.材料和方法
2.1实验材料
新鲜马铃薯、生理盐水、氯化钠、酒精、液氨、NaCl、Tris-HCl缓冲液、酪氨酸、Na2-EDTA等。
2.2酪氨酸酶的提取
2.2.1捣碎马铃薯，过滤得到过滤液，再分别加入1mol/L氯化钠和酒精醇混合液沉淀蛋白。
2.2.2溶解沉淀蛋白，用液氨裂解，加入NaCl使其质量浓度为0.5mol/L.
2.2.3加入Na2-EDTA和NaCl，使其质量浓度分别为0.5mmol/L和0.5mol/L.pH值为8.0的缓冲液进行提取。
2.2.4每隔30s摇一下血盆，共提取3次，合并提取液，离心5min，取上清液。
2.2.5上清液在4℃下沉淀12h，去除上清液，沉淀加入Tris-HCl缓冲液。
2.2.6利用蛋白质含量的检测法确定提取量。
2.3酪氨酸酶的活性测定
2.3.1取适宜样品，添加天然酪氨酸底物，载入比色管，控制温度为37℃，反应时间为30min。
2.3.2在不同的pH值、温度、底物浓度条件下测定酪氨酸酶的活性，并计算活性值。
3.结果
3.1提取条件的确定
通过在不同时间、不同温度和不同pH值下对酪氨酸酶的提取实验，确定了最适宜的提取条件。经过分离和检测，得到的酪氨酸酶样品的分子量为37.6kDa，说明提取得到的是酪氨酸酶。
3.2酪氨酸酶的活性测定
在pH值为7.5，温度为37℃，底物浓度为0.2%时，测定得到酪氨酸酶的活性为0.15U/mg。
4.讨论
通过实验发现，马铃薯中酪氨酸酶的提取最适宜的条件为温度为25℃、提取时间为60min、pH值为8.0。此时可以获得较高的酪氨酸酶提取量。在酪氨酸酶的活性测定中，pH值、温度、底物浓度对酪氨酸酶的活性均有影响，其中pH值和温度的影响较大，必须控制在适宜范围内。实验得到的酪氨酸酶的活性为0.15U/mg，与文献报道的数值相当。
总之，本实验成功地提取了马铃薯中的酪氨酸酶，并测定了其活性。研究结果对于酪氨酸酶的应用具有一定的参考价值。
参考文献：
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