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对虾白斑综合症病毒vp15基因的RNA干扰研究
摘要
对虾白斑综合症病毒（WSSV）是对虾养殖业中经常发生的一种疾病，引起了养殖业者的关注。本研究利用RNA干扰技术，设计合成了vp15基因特异性siRNA，并对其进行转染实验。结果表明，vp15基因特异性siRNA可以显著地降低WSSV感染对虾细胞中vp15基因的表达，从而减轻WSSV感染对虾细胞的病毒负担。本研究结果表明，RNA干扰技术在对虾WSSV病毒的防治中具有广阔的应用前景。
关键词：RNA干扰，vp15基因，WSSV，siRNA
引言
对虾是我国养殖业中最重要的水产品之一，在全球渔业中占据着重要的份额。然而，对虾白斑综合症病毒（WSSV）的爆发常常导致对虾大量死亡，给养殖业造成了严重的经济损失。WSSV的主要传播途径是水体，一旦感染到对虾，就会引起对虾体内的一系列病变，包括体色改变、体型萎缩、脱皮和虾体内器官受损等。目前，虽然对虾WSSV病毒的防治措施已经取得了一定的进展，但仍然缺乏有效的治疗手段。
RNA干扰技术是一种能够靶向抑制基因表达的新技术，已经广泛应用于许多生物领域中。本研究利用RNA干扰技术，以vp15基因为靶点，通过合成vp15基因特异性siRNA对对虾细胞进行转染实验，评估其在WSSV病毒的防治中的应用前景。
材料与方法
对虾细胞系极口虾（Hemocyte）细胞系
试剂与材料WSSV病毒溶液、对虾细胞培养基、siRNA合成试剂盒
实验过程
1.合成vp15基因特异性siRNA及负对照siRNA；
2.制备Hemocyte细胞系；
3.将vp15基因特异性siRNA和负对照siRNA与细胞转染试剂混合后按照实验组织细胞培养基的浓度转染到Hemocyte细胞系中；
4.48h后加入WSSV病毒溶液，接着继续培养24h；
5.收集Hemocyte细胞系，提取总RNA，通过RT-qPCR测定vp15基因和内参基因的表达。
结果
1.合成vp15基因特异性siRNA成功；
2.vp15基因特异性siRNA和负对照siRNA可以成功地转染到Hemocyte细胞系中；
3.vp15基因特异性siRNA显著地降低WSSV感染对虾细胞中vp15基因的表达。
结论
本研究结果表明，RNA干扰技术可以靶向抑制WSSV病毒感染对虾细胞中vp15基因的表达，从而减轻WSSV感染对虾细胞的病毒负担。RNA干扰技术在对虾WSSV病毒的防治中具有广泛的应用前景。
参考文献
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