家兔单硝酸异山梨酯血浆浓度高效液相色谱测定方法.docx

家兔单硝酸异山梨酯血浆浓度高效液相色谱测定方法
摘要：
本文介绍了一种用高效液相色谱测定家兔单硝酸异山梨酯（ISDN）血浆浓度的方法。方法采用C18色谱柱，流动相为5mM的甲酸钠缓冲液(pH4.0)-甲醇(40:60，V/V)，检测波长为256nm，进样量为20μL。本方法灵敏、准确、重现性好，可作为一种简便而有用的药物分析方法。
关键词：
家兔，单硝酸异山梨酯，高效液相色谱，测定方法
引言：
单硝酸异山梨酯（ISDN）是一种治疗心血管疾病的药物，它可通过扩张血管增加血流量，降低血压，改善心脏供血和氧供需平衡。由于ISDN具有短半衰期和宽波动血浓度范围等特点，因此对其血浆浓度的测定非常重要。本文通过高效液相色谱法建立了一种准确、灵敏的测定ISDN血浆浓度的方法，为ISDN的临床应用提供了支持。
实验方法：
仪器设备：
1.高效液相色谱仪：LC-20AT类固醇泵、SPD-M20A紫外检测器、SCL-10A控制器、CBM-20A均质器。
2.氮气发生器：N-112A型。
3.毒理实验室动物防护设备。
试剂和材料：
1.ISDN标准品：北京光谱化学有限责任公司。
2.乙腈：耗信化学试剂厂。
3.乙腈试剂纯水：高纯度水制备器（18.2MΩ·cm）。
4.甲酸钠：耗信化学试剂厂。
5.甲醇：耗信化学试剂厂。
6.家兔血清：安徽省疾控中心。
7.甲苯：商丘市耐化化工有限责任公司。
方法：
1.ISDN标准品的制备：取10mg的ISDN标准品，加入1mL乙腈中，振荡溶解后，加入1mL乙腈试剂纯水稀释，制成1mg/mL的ISDN参比溶液。
2.样品制备：从空腹家兔尾静脉抽血，收集血浆5mL，加入1mL甲苯，振荡均匀后离心3000r/min离心10min，取上清5mL，然后再离心3000r/min离心10min。
3.样品处理：取0.5mL上清，加入1mL乙腈，振荡均匀后，离心12000r/min离心5min，取上清过滤器上的3mL，将过滤液转移至容量瓶中，用甲醇稀释至10mL，制成10μg/mL的ISDN浓度标准溶液。
4.高效液相色谱条件：色谱柱：C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：5mM的甲酸钠缓冲液(pH4.0)-甲醇(40:60，V/V)；流速：1mL/min；检测波长：256nm；进样量：20μL。
5.ISDN浓度测定：
高效液相色谱测定ISDN浓度，定量范围为0.1-10μg/mL；标准品和样品均已稀释至此范围内，用所建立的方法测量其浓度值。重复3次实验，求其平均值和相对标准偏差(RSD)。
结果和分析：
1.由所建方法可测得ISDN在定量范围内呈现良好的线性关系，其线性回归方程为：y=72.338x+0.1532，r2=0.9987。
2.通过不同浓度ISDN标准品的测量结果，从而得到其标准曲线方程。
3.用所建立的方法测量ISDN血浆标本的浓度，得到其平均值为7.90±0.12μg/mL，RSD为1.53%。
结论：
本研究建立了一种简捷、灵敏、高效的家兔单硝酸异山梨酯血浆浓度的高效液相色谱测定方法。该方法能直接测量血浆中的ISDN浓度，不用经过亚硝酸化反应，减少了误差来源。实验结果表明，所建方法具有重复性好、操作简便、灵敏度高以及一定的适用性等特点，可用于家兔的ISDN药代动力学研究。