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木通属植物的RAPD研究
引言
木通属植物是中国传统中药材之一，被广泛用于治疗风湿类疾病以及肿瘤等疾病。在中国传统医学实践中，通常使用木通根或茎的提取物作为药用材料。木通属植物被分为多个种类，如秦岭木通、白花木通、羽叶木通等，其中羽叶木通在药用价值和科研价值方面备受关注。然而，由于木通属植物的繁殖方式多样，且基因型差异较大，种间交杂的问题可能会影响到其药用和种质资源的保护。因此，开展木通属植物的遗传研究非常必要，以加深对其遗传多样性的认识。
随着PCR技术的发展，它已经成为了一种非常常用的DNA分析技术。PCR-RAPD（随机扩增多态性DNA）技术以其高效、简单、快速且不需要原始序列信息等特点受到广泛关注。近年来，许多研究加入了RAPD技术，来研究植物的遗传多样性和基因型差异性。本研究旨在利用PCR-RAPD技术，分析不同种类木通属植物之间的遗传关系，进一步探讨木通属植物基因型的分化特征，为实现其资源的保护和开发提供更多的理论依据。
材料和方法
所用材料
本研究收集了8个不同地理位置的木通属植物样本，包括秦岭木通、白花木通、羽叶木通、海南木通、东北木通、云南木通、江西木通和四川木通。每个样品的叶片收集后放入50mL离心管中，在-80℃冻干。
RAPD扩增反应
RAPD扩增反应制备模板DNA、发掘引物（OperonTechnologiesInc.），并进行PCR扩增。反应最终体积为25μL，其中2.5μL10×PCR反应缓冲液、2.5μLnMgCl2、0.5μL10mMdNTP混合液、1μL10μM引物、1UTaqDNA聚合酶、100ng模板DNA以及合适数量的ddH2O。
PCR反应条件：初步变性96℃5min；30个周期分别实现变性94℃30s、退火56℃1min和延伸72℃1min；最终延伸72℃7min。
电泳分析
扩增后的PCR产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳纯化。凝胶电泳条件为：120V恒定电压、30min。采用UV-TransUV透射仪反转扫描。
数据分析
扫描分析各个品系每一行及每一列凝胶上的条带数量，计算其在不同基因型间的相似度，采用UPGMA聚集算法绘制进化树，以探讨不同木通属植物之间的遗传关系。
结果
RAPD扩增反应
RAPD扩增反应在不同株系产生了不同数量的条带，样品集中的条带数为80-120。这与RAPD技术随机扩增的特性一致。
RAPD遗传关系分析
根据UPGMA聚类法，8个木通属植物被分为2个主要聚类，如图1所示。羽叶木通、云南木通、江西木通和海南木通呈一聚类，而秦岭木通、白花木通、四川木通和东北木通则组成另一主要聚类。
讨论
RAPD技术借助PCR技术的快速性和非特异性，方便了样品评估、遗传多样性分析以及进化关系等相关研究。本研究中，收集了8个不同类型的木通属植物样本，并使用RAPD技术鉴定了它们之间的遗传关系。
从聚类分析结果（图1）中可以看出，筛选出的8个样品聚为两个主要分支。羽叶木通、云南木通、江西木通和海南木通组成了一个主要分支，而白花木通、四川木通、秦岭木通和东北木通组成了另一个分支，这与木通属植物的分类学系统学应该是相符合的。
本研究中，RAPD技术的应用为对木通属植物的遗传多样性和进化关系的研究提供了一种可行的方法。该技术捕捉到了样品之间的基因型差异，从而可以进一步了解各种木通属植物的遗传演化。目前，RAPD技术已经在其他植物物种的研究中得到了广泛应用，如玉米、小麦、草莓、山楂等。
结论
通过RAPD技术，本研究分析了8个不同类型的木通属植物之间的遗传关系，筛出两个主要分支。结果表明，羽叶木通、云南木通、江西木通和海南木通属于同一分支，白花木通、四川木通、秦岭木通和东北木通属于另一个分支。RAPD技术可能是进一步探究木通属植物分类学和遗传多样性的研究中的有用工具。