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氨基酸测定的研究(上)
氨基酸是构成蛋白质的基本成分，而测定氨基酸的含量及种类，对于研究蛋白质的结构与功能具有重要意义。本文将介绍氨基酸测定的原理、方法及应用。
一、氨基酸的结构与特性
氨基酸是有机化合物，由氨基(-NH2)、羧基(-COOH)和侧链组成。在生物中，氨基酸分为20种不同的成分，每一种氨基酸都具有不同的侧链结构，这决定了它们在蛋白质中的特定作用。氨基酸是生物体内合成蛋白质的原料，也能为葡萄糖、脂肪等代谢提供能量。
二、氨基酸测定的原理
氨基酸测定方法主要有两种：紫外光（UV）光度法和色氨酸-硫酸铵（TNBSA）显色法。UV光度法适用于含有芳香族氨基酸的样品，如苯丙氨酸、酪氨酸等；而TNBSA显色法偏向适用于不含芳香族氨基酸的样品。本文将介绍UV光度法原理。
UV光度法基于氨基酸在近紫外区（220-280nm）的吸收能力。在此波长下，氨基酸的产生最大吸收峰。吸收（A）和浓度（c）之间的关系由Lambert-Beer公式表示，即A=εlc。其中，ε称为摩尔吸光系数（molarabsorptivity），l为光路长度，单位为厘米。ε值是离子强度、温度、pH值、波长和氨基酸链长等影响的函数。
三、氨基酸测定的方法
氨基酸测定方法传统上使用比色法，但是这种方法的使用有时需要补偿糖、脂肪和其他干扰物的存在。UV光度法有相对较高的特异性，可以在不需要补偿干扰物的情况下测量氨基酸。使用UV光度法可以实现与DNPH反应相比高效的反应，并且需要的时间更短。
UV光度法测定氨基酸的步骤如下：
1、将样品分为对照组和实验组。对照组只含有溶剂和缺乏某些氨基酸的混合物。实验组除了这些，还包括不同含氨基酸的混合物。
2、将试管放入比色计中，并使用光电子管扫描分光计设置波长。这些波长通常为250nm、280nm和310nm。
3、在UV波长下进行测定。
4、样品反应10-15分钟后，记录吸光度。
5、每个氨基酸都有一个特定的吸光度值。这些值可以在特定的氨基酸吸光度光谱图上找到。
6、使用计算机将光谱图与标准曲线进行比较，以确定氨基酸浓度。
四、应用
氨基酸测定是生物学研究中不可或缺的技术。氨基酸测定通常被用来确定某些蛋白质的含量，例如毒蕈碱等，同时也可用于测定人类尿液中的氨基酸型谷氨酸尿症(MGA)和其它紊乱。
此外，氨基酸在医药领域的应用也非常广泛，可以用来制造生物合成药物、抗生素、催化剂和氨基酸诊断试剂等。
总之，氨基酸测定技术是生命科学研究领域中不可或缺的技术，其在分子生物学、生物化学、药学、医学等领域都有着广泛的应用。