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细胞活性测定方法研究进展
细胞活性测定方法是研究细胞生命活动状态的关键技术之一,其重要性体现在药物筛选、毒理学研究、细胞生物学方面的应用中。在过去的几十年中,细胞活性测定方法已经经历了从定性到半定量再到定量化的发展过程,同时也有了从单维度到多维度的拓展。下面就细胞活性测定方法的研究进展进行一些讨论。
1、MTT法
MTT法是最早用于细胞毒性筛选的方法之一,是指通过MTT(3-(4,5-二甲硫烷-2-基)-2,5-二苯基四唑)对细胞进行染色并测定颜色强度来判断细胞的生命活性。MTT法具有反应快速、操作简单、高通量化等优点,但是该方法存在细胞类型和药物类型的限制性,只能适用于一部分药物和细胞类型。
2、CCK-8法
CCK-8法是一种新型的细胞活性测定方法,是基于MTT法原理的改进方法,应用较为广泛。CCK-8法利用水溶性四呋喃酮类染色剂CCK-8(cellcountingkit-8)的还原作用来获取细胞存活率。该方法反应快速,实验步骤简单,同时还有高度灵敏性和可重复性,不受样本大小和酶的影响,因此被广泛应用于药物筛选、毒理学研究和细胞生物学等领域。
3、细胞荧光素酶法
细胞荧光素酶法(CellTiter-Glo)是一种基于细胞的安乐死(apoptosis)程度而设计的测定细胞活性的方法,是一种高度敏感性的细胞寿命分析技术。该方法利用荧光素酶作为指标,在无细胞内酶作用下将荧光素磷酸盐还原为可发出荧光的荧光素,需要的仪器设备较少,且无需染色,反应一次性完成,具有较高的检测灵敏性和操作方便性。
4、流式细胞术
流式细胞术是一种多参数、定量化的高通量化技术,可对单元细胞进行快速、精确、高质量的分析和筛选。流式细胞术可以同时测定多个指标,包括细胞周期、DNA含量、细胞形态、细胞凋亡和细胞位移,是一种全面分析细胞特性及其生命状态的方法。
5、细胞阻滞法
细胞阻滞法是一种利用化学、物理、生物方法,通过特定刺激阻止生长密度限制性生长细胞周期进行测定的方法。细胞阻滞法通常可用于研究药物对细胞周期的影响,如药物对细胞进入G1期的阻止、相邻周期转换的结束等。然而,细胞阻滞法的缺点是结果受到生长状态、浓度、时间和温度等多种因素的影响,同时只能测定遗传诱导的细胞阻滞现象。
总之,随着科学技术的不断发展,细胞活性测定方法涉及的领域不断扩大,从单一维度到多维度的发展是目前研究的趋势。新的测定方法的出现一方面能够使得研究更全面、准确、高效、低损伤性,另一方面能够为药物筛选与毒理研究提供更为广泛的可选择方法。
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