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乳胶凝集试验检测鸭3型腺病毒方法的建立及应用
Introduction
鸭3型腺病毒(Duckadenovirustype3,DAV-3)是一种常见的禽病毒,能引起鸭的呼吸道、肠道疾病等,对家禽业造成威胁。传统的DAV-3检测方法主要包括血清学检测和分子生物学检测两种,但这些方法存在一些问题,比如操作复杂、时间长、准确性不高等,因此寻找一种更加简便、高效的DAV-3检测方法就显得尤为重要。近年来,乳胶凝集试验(latexagglutinationassay,LA)逐渐发展成为一种广泛应用的免疫学检测方法,本文旨在建立一种基于LA检测DAV-3的方法,并开展相关应用研究。
Materialsandmethods
1.病毒株:采用我国鸭3型腺病毒标准毒株进行本研究。
2.免疫球蛋白抗体制备:采用SDS-PAGE法从免疫鸡中纯化得到抗-DAV-3免疫球蛋白。
3.凝集试纸的制作:在50mmx9mm圆点型滤纸上滴加减少剂,再滴加2.5%聚丙烯酰胺溶液以及抗D-AV-3免疫球蛋白制成凝集试纸,真空干燥后串为片状。
4.凝集试验方法:先将病毒液体加入到涂了抗D-AV-3免疫球蛋白的凝集试纸上,摇晃,观察反应结果。
Results
1.病毒纯化
通过离心、悬浮、分层等步骤,从感染的组织中提取DAV-3纯化。
2.抗体制备
采用SDS-PAGE法从免疫鸡中纯化得到抗DAV-3免疫球蛋白。
3.凝集试纸制作
制作抗DAV-3免疫球蛋白涂层的凝集试纸,凝集试纸涂层的抗体经过测试,能够与DAV-3进行特异性反应。
4.凝集试验结果
对提取出来的DAV-3进行凝集试验,以凝集反应为正。结果显示,采用凝集试验检测DAV-3,可以达到良好的特异性和敏感性。
Conclusion
本研究基于乳胶凝集试验建立了一种快速、简单、可靠地检测DAV-3的方法。结果显示,该方法具有较高的特异性和准确性,具有良好的应用前景。
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