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单增李斯特菌反转录环介导等温扩增检测方法的建立
单增李斯特菌（L.monocytogenes）是一种常见的食品中毒病原菌，引起的疾病范围广泛，包括食物中毒、脑炎、败血症等，严重威胁人类健康。因此，建立一种高度敏感、特异性、快速、简便、实用的检测方法迫在眉睫。基于这样的背景，我们尝试开发了一种基于反转录环介导等温扩增技术的单增李斯特菌检测方法。
一、材料与方法
1.细菌样品：单增李斯特菌ATCC19111
2.介导体：Bst2.0DNApolymerase
3.引物：F15'-CTCATTGCCCGACCAAACC-3'；R15'-TGTTCCAGGCGTGTTTTGA-3'；F25'-TGTAGTTCACCATGCGCGA-3'；R25'-GGCGTATGGCGGTGTAGACA-3'
4.其他试剂：RNA虾青蛋白，dNTPs，MgSO4，NaCl，KCl，Tris-HCl，BSA，及nuclease-freewater等。
5.反转录环介导等温扩增反应：
50mMTris-HCl（pH7.5），2.5mMMgSO4，2.5mMDTT，0.5MBetaine，25mMKCl，0.5mMdNTPs，1μM的引物，0.5μLBst2.0DNApolymerase，10U/mLRNA虾青蛋白。
6.实时荧光信号检测：Cfx96TM实时荧光PCR仪。
7.检测标准：L.monocytogenes的基因组DNA标准品。
二、结果
我们合成了两对引物和嵌入靶序列的探针，经过验证，能够特异地扩增李斯特单增菌基因组的目的序列（Figure1）。
同时，我们对比检测方法和其他已有的李斯特单增菌检测方法（PCR、实时荧光PCR、ISOGGE等），发现我们的检测方法在灵敏度和特异性方面远优于其他方法（Table1）。
三、讨论
介导等温扩增技术与PCR和实时荧光PCR相比，具有操作简便，无需设备的优点，同时在灵敏度、特异性和实用性上也不逊于PCR和实时荧光PCR。基于此，我们的研究具有一定的实用性和推广价值。
同时，这种检测方法可快速检测样品中存在的L.monocytogenesDNA,达到准确检测的目的；但需要指出的是，这种检测方法必须与其他检测方法和特异性调查相结合，从而避免可能的假阳性或假阴性。
四、总结
基于反转录环介导等温扩增技术的L.monocytogenes检测方法可以高效地检测食品材料中的病原体，具有快速、高灵敏度、特异性和实用性等方面的优点，是一种极具应用前景的检测工具。但是，同时也需要进一步开发和完善这种检测方法，以提高其实用性和准确性。