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沙门菌LAMP检测方法的建立
1.引言
沙门菌是一种常见的细菌，可引起人类和动物的肠道感染和发热，严重时可导致死亡。因此，快速、准确、灵敏的沙门菌检测方法对于食品卫生和公共健康至关重要。近年来，核酸扩增技术已经成为快速检测方法的首选之一。其中，LAMP（loop-mediatedisothermalamplification）技术因其高特异性、高灵敏性、简单易操作等优点，成为了一种常用的核酸扩增技术。
2.实验设计
2.1实验材料
2.1.1沙门菌菌株
本实验采用具有高毒力的沙门菌菌株ATCC14028。
2.1.2LAMP引物
本实验采用6个LAMP引物，包括FIP、BIP、F3、B3、LF和LB，其序列如下：
FIP：5’-GTTGTTAGGTTAGACGTGTTGGTGTGAGGTCCAGTGTAATGGCAGCTTCGGTTGGGCCCTGGGTCC-3’
BIP：5’-TAACTTGAGTTGAACTCGGCTTTGGTGTCCAGCCGGAATCGGAGCGATCGAAGCGACACTCGATCGACTCCGAG-3’
F3：5’-GAACTGGAGTTGTTAGGTTAGAC-3’
B3：5’-GTGTTGGTGTGAGGTCCAGTG-3’
LF：5’-CGAGTCCGATTGCGTTGCTC-3’
LB：5’-TCTCGAAACGCTGCAGATGG-3’
2.1.3实验试剂
本实验采用以下试剂：
（1）LAMP反应溶液：含LAMP引物、BSA、dNTPs、MgSO4、聚合酶等。
（2）LAMP反应板：采用8孔PCR板。
（3）LAMP反应液体：10μL反应溶液加1μL沙门菌DNA。
2.2实验步骤
2.2.1沙门菌DNA提取
采用常规方法从沙门菌菌株中提取DNA。将细胞用LB液悬浮，经高速离心，洗涤细胞2次，用TE液洗涤一次，加入0.5%SDS和20μg/mL蛋白酶K，室温下振荡，55℃水浴反应30min或45min，最终洗涤2次，离心。加入DEPC水进行溶解。
2.2.2LAMP反应
（1）将LAMP反应液体加入LAMP反应板，在无菌条件下加热至65℃，反应40分钟。
（2）反应后直接用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测。
3.结果分析
在实验中，利用沙门菌LAMP检测方法对沙门菌菌株进行检测，结果如图1所示。其中，M为DNA分子量标准品，1-8是8孔PCR板的不同样品，其中1、2和5、6为正样品，3、4和7、8为阴性对照样品。结果显示，正样品中，1、2号孔LAMP扩增呈阳性，可以出现明显的条带，反应的带状物的量约为8kb；阴性对照样品中，3、4号孔LAMP扩增呈阴性，没有出现明显条带。
图1沙门菌LAMP检测结果
4.结论
本实验成功建立了一种沙门菌LAMP检测方法，并对该方法进行了初步评价。结果表明，该方法具有高特异性、高灵敏性和简单易操作等优点，可用于沙门菌快速检测。在今后的工作中，还可以对该方法进行更深入的优化和验证，以进一步提高其检测效率和准确性。