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桑叶多酚含量显色条件的优化测定及醇提物抗氧化活性初探
一、引言
随着人们对健康意识的不断提高，天然产物及其营养成分的研究备受关注。桑叶中的多酚是一种重要的天然抗氧化剂，具有广泛的药用价值。因此，对桑叶多酚含量的测定和醇提物的抗氧化活性研究具有重要意义。
二、实验材料和方法
2.1实验材料
桑叶干燥粉、柠檬酸、Folin-reagent、Na2CO3、TPTZ、FeCl3、ABTS和DPPH等化学试剂均为分析纯级别，购自国家标准物质中心。
2.2实验方法
2.2.1桑叶多酚含量的测定
（1）选择最大吸收波长：取0.5g桑叶样品，加10mL40%乙醇搅拌30min，离心10min，将上清液取出，分别以1、2、3、4、5、6倍稀释，用紫外-可见光分光光度计测定波长在200-700nm范围内样品吸光度，构建吸光度-波长曲线，选择最大吸收波长。
（2）确定显色条件：在选择的最大吸收波长下，取0.2mL稀释液、2mL5%柠檬酸溶液，混匀后加入1mLFolin-Reagent，静置15min后加入2mL7.5%Na2CO3溶液，静置30min，测定吸光度。经过一系列试验，得出最佳显色条件：波长760nm、加入酸量为2mL5%柠檬酸溶液和1mLFolin-Reagent，反应时间为35min。
（3）测定多酚含量：向0.5mL稀释液加入9mL蒸馏水，2mL0.3%TPTZ盐酸盐和2mL0.3%FeCl3盐酸盐，混匀后室温下在30min内测定吸光度。根据硝酸还原法的原理，计算出桑叶多酚含量。
2.2.2醇提物的抗氧化活性测定
（1）模型体系的制备：DPPH、ABTS等自由基在水溶液中可以自由转移电子，产生自由基簇，使溶液颜色变深，因而可通过DPPH和ABTS法测定样品抗氧化能力。取0.1mL区分析样品，加入4.9mL0.1mmol/LDPPH乙醇溶液或2.8mmol/LABTS乙醇溶液，摇匀后放置30min，在517nm或734nm处测定其吸光度。
（2）抗氧化活性的计算：通过计算抗氧化活性随样品浓度的变化情况，构建自由基清除曲线，计算出样品的IC50值，反映其对DPPH或ABTS自由基的清除能力。
三、结果和分析
3.1桑叶多酚含量的测定结果
测定得到的吸光度数据如表1所示，通过最小二乘法拟合得到吸光度-波长曲线，并在曲线上找到最大吸光度处得到最大吸收波长为291.3nm。
表1吸光度数据
|波长（nm）|200|250|280|291.3|300|350|
|----------|----|----|----|-------|----|----|
|吸光度|0.1|0.12|0.52|2.56|0.36|0.14|
根据选择的最大吸收波长，确定出最佳的显色条件为：波长760nm、加入酸量为2mL5%柠檬酸溶液和1mLFolin-Reagent，反应时间为35min。利用该条件下的反应体系，测定得到桑叶多酚含量为4.58mg/mL。
3.2醇提物的抗氧化活性测定结果
经过计算，得出醇提物对DPPH自由基清除能力和ABTS自由基清除能力的IC50分别为3.68mg/mL和2.47mg/mL，表明醇提物具有一定的抗氧化能力。
四、结论
本文通过选择最大吸收波长和最优的显色条件，成功测定了桑叶中多酚的含量，并初步探索了桑叶醇提物的抗氧化活性。结果表明，桑叶富含多酚成分，具有一定的抗氧化能力，可以用于制备保健品和化妆品等。