洛阳地区规模化猪场大肠杆菌耐药基因检测及耐药性分析.docx

洛阳地区规模化猪场大肠杆菌耐药基因检测及耐药性分析
摘要
猪肉是人们日常生活中重要的蛋白质来源之一，但由于规模化养殖的广泛应用，导致猪场内大肠杆菌耐药性的增加，加剧了大肠杆菌引起的感染和疾病的病情的复杂性，成为了现代畜牧业一个主要问题。本研究对洛阳地区规模化猪场大肠杆菌耐药基因进行了检测，分别对耐药性进行了分析，旨在为洛阳地区的畜牧业提供相关参考。
关键词：规模化猪场；大肠杆菌；耐药性；基因检测；洛阳地区
引言
规模化养殖是现代畜牧业的主要方式之一，并且它可以提高畜牧业的生产效率，但是规模化养殖过程中疾病的流行也成为了一个重要的问题。其中大肠杆菌是猪场中最常见的致病菌之一，它所引起的疾病也越来越具有复杂性。同时，大肠杆菌的耐药性在猪场中也逐渐增加，导致了大肠杆菌感染的治疗难度加大。因此，对于大肠杆菌耐药基因的检测及其耐药性的分析就显得尤为重要。
材料与方法
样品采集
本研究选取了洛阳地区两个规模化猪场的肠道内容物作为检测样品。分别在猪舍内取样，将肠道内容物装入消毒过的离心管中，并在4℃下冷藏备用。
基因检测
实验室采用聚合酶链式反应（PCR）技术，以自行设计的大肠杆菌耐药基因引物，分别检测了两个猪场的样品。PCR反应液总体积为25μL，包含PCR酶1U、10×PCR缓冲液2.5μL、每个引物0.2μmol/L、每个dNTP0.2μmol/L、模板DNA50ng及ddH2O至总体积。PCR反应条件如下:95℃预变性2min，94℃变性20s，引物退火50s，72℃延伸1min，共反复35次。扩增产物分别于1%琼脂糖凝胶中电泳，进行目标PCR产物的有效性检测。
耐药性分析
本研究采用序列比对和生物信息学在不同细菌群体间比较，以确定检测到的大肠杆菌耐药基因类型及其对应的耐药性。
结果
基因检测结果
本研究从两个猪场共采集到了60个肠道内容物样品。经PCR扩增和电泳检测，共检测到9种不同的耐药基因类型，分别为SHV-1,TEM-1,CTX-M-3,CTX-M-5,CTX-M-14,CTX-M-15,aac(6')-Ib,sul1和tetA。其中CTX-M-15和sul1的检出率最高，分别为45%和30%。
耐药性分析结果
本研究将PCR扩增获得的基因片段序列与GenBank中相应序列进行比对并分析它们之间的相似性。结果表明，大肠杆菌耐药基因主要受到CTX-M和sul1影响，而对于SHV-1和TEM-1耐药基因的鉴定率低。
讨论
本研究检测结果表明，洛阳地区规模化猪场中存在着多样性的大肠杆菌耐药基因类型。这些基因的高检出率表明，规模化养殖环境促进了大肠杆菌耐药基因的扩散，进一步加剧了治疗复杂性和感染的风险。CTX-M-15和sul1耐药基因是两个猪场中最常见的耐药基因类型，这些基因通常与抗生素残留有关，因此需要对其进行充分控制。同时，这些发现也提示我们，在规模化畜牧业环境中，大肠杆菌耐药性的监测和控制是必不可少的。
结论
本研究针对洛阳地区规模化猪场的大肠杆菌耐药基因进行了检测和分析，结果显示大肠杆菌的耐药性剧增，导致治疗大肠杆菌感染的治疗难度加大。CTX-M-15和sul1耐药基因是猪场中最常见的耐药基因类型，控制这些基因的扩散是当前治理大肠杆菌感染的关键。因此，监测和控制规模化畜牧业环境中大肠杆菌耐药性的加强具有重要的意义。