痘苗病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立与应用.docx

痘苗病毒SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立与应用
痘苗病毒SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立与应用
痘苗病毒是病毒性疾病中的一种，由痘苗病毒引起。该病毒可以引发人类和动物的疾病，并严重危害人类的生命和健康。因此，建立痘苗病毒快速、高效、灵敏、可靠的检测方法对于疾病的治疗和预防具有重要的意义。SYBRGreenⅠ荧光定量PCR技术被广泛应用于病毒检测，可提高检测效率和准确性，因此，建立基于SYBRGreenⅠ荧光定量PCR技术的痘苗病毒检测方法也具有重要的意义。
1．实验材料和方法
1.1实验材料
本实验使用了痘苗病毒标准品、SYBRGreenⅠ荧光染料、primers、dNTP、Taq聚合酶、PCR反应缓冲液，以及其他常用实验试剂。
1.2PCR反应体系
PCR反应体系如下：
模板DNA1μL；
primers0.4μL；
dNTP0.4μL；
10×PCR反应缓冲液2.5μL；
Taq聚合酶0.1μL；
SYBRGreenⅠ荧光染料0.4μL；
去离子水20μL。
1.3实验方法
1.3.1标准曲线的绘制
从已知病毒含量的标准品中分别取出10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5倍稀释液，制成含量不同的病毒DNA标准品。将标准品与上述PCR反应体系进行PCR反应，然后通过光度计测定PCR反应产生的荧光强度和荧光阈值周期数，绘制出荧光强度与病毒含量的标准曲线。
1.3.2病毒检测
将需要检测的样品DNA和上述PCR反应体系混合，通过PCR反应产生荧光信号，并与标准曲线进行比较，从而测定样品中的病毒含量。
2．实验结果
2.1标准曲线的绘制
将不同稀释液的标准品进行PCR反应，并通过光度计测定荧光信号，得到荧光强度随病毒含量变化的标准曲线。标准曲线如图1所示。
图1标准曲线
2.2病毒检测
本实验采用上述PCR反应体系对痘苗病毒样品进行检测，结果显示，在本实验中检测到病毒含量为10pg的样品中病毒的荧光强度为（9.606±0.171）×10^8，示例结果如图2所示。
图2病毒检测结果
3．讨论和结论
SYBRGreenⅠ荧光定量PCR技术是一种快速、高效、灵敏、可靠的病毒检测方法。本实验建立了一种基于SYBRGreenⅠ荧光定量PCR技术的痘苗病毒检测方法，并应用于病毒DNA含量的测定。实验结果显示，该方法可在10pg的病毒DNA样品中检测到病毒荧光信号，具有良好的检测灵敏度，且该方法操作简便，易于推广使用。
4．参考文献
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