青藏高原放牧家畜小肠结肠炎耶尔森氏菌LAMP检测方法的建立及应用.docx

青藏高原放牧家畜小肠结肠炎耶尔森氏菌LAMP检测方法的建立及应用
一、绪论
青藏高原是世界上海拔最高、气候最寒冷、草地最广阔、牧民最多的高原地区之一。在这里，放牧是当地主要的经济活动和生计来源。由于放牧生产的规模和水平相对较低，动物饮食和卫生状况差，导致畜禽疾病频繁发生。其中，小肠结肠炎是一种常见的疾病，主要由细菌引起。而耶尔森氏菌是一种重要的病原细菌，常导致食物中毒和胃肠道感染。因此，快速、准确地检测耶尔森氏菌对于保障畜禽产品的质量和卫生至关重要。
二、耶尔森氏菌检测方法的研究现状
目前，检测耶尔森氏菌主要采用分子生物学方法。这些方法包括PCR法、实时荧光PCR法、LAMP法等。其中，LAMP法因其具有快速、简便、高度特异性和敏感性等特点，已经成为一种重要的检测方法。
三、建立青藏高原放牧家畜小肠结肠炎耶尔森氏菌LAMP检测方法
1.标本收集和处理
为了收集到代表性标本，在青藏高原的放牧地区，选择病症较为严重的10头牛，收集它们的粪便和肠道组织作为样本。继而，使用分子生物学方法提取DNA模板。
2.LAMP扩增反应
LAMP扩增反应由外、内两对引物、BstDNA聚合酶、deoxynucleotidetriphosphate和反应缓冲液等组成。在本实验中，LAMP反应体系由20µL2×LAMPMix、2.5µLDNA模板、1µLBstDNA聚合酶、1µLSYBRGreenI和适量的deionizedwater组成。在恒温扩增过程中，通过观察LAMP反应所发出的黄绿色荧光信号进行判断。
3.LAMP扩增产物检测
将LAMP扩增反应体系中的产物进行凝胶电泳，可清晰地观察到等电点移动电泳带，验证LAMP扩增反应的成功性。
四、结果
本实验中，使用LAMP方法成功检测到了10头牛的肠道组织和粪便样本中的耶尔森氏菌。
五、讨论与结论
本实验建立了一种青藏高原放牧家畜小肠结肠炎耶尔森氏菌的LAMP检测方法，该方法基于LAMP技术具有快速、准确、高度特异性和敏感性等优点，为畜禽产品的质量和卫生提供了有效保障。在未来的研究中，还可以通过比对验证，继续优化LAMP方法的适用性和鉴定性。