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4种常用除草剂的高效液相色谱分析
本文将介绍常用的四种除草剂（草甘膦、异丙草胺、草铵膦、硫酸钠乙酯）的高效液相色谱（HPLC）分析方法。由于除草剂的化学性质不同，分析方法也各有不同，但总体流程相似。本文将介绍样品前处理、色谱条件、检测方法和数据处理等方面的内容。
1.样品前处理
在进行除草剂的色谱分析前，样品需要被提取、纯化和浓缩。一般使用固相萃取技术（SPE）对水样、土样和植物组织进行提取。具体操作如下：
1）样品加入一定量的内标物，混合在离心管内。目的是来确定梯度淋洗的总提取效率。内标物可以使用草甘膦-d3、草铵膦-d3等。
2）蛋白质沉淀：加入一定体积的氯仿与冰冷丙酮混合液质量比1:1，离心分离上层水相；取水相加20μL草铵膦免费离子，加入0.5mL盐酸/乙腈（体积比1:1）混合溶剂，于混质时间5min左右再次离心分离，取上层加入102μL草铵膦免费离子，于混质时间5min。
3）固相萃取柱处理：将固相萃取柱利用甲醇和纯水顺序预洗并等体积平衡。将离心管内提取液加入到预洗后的SPE柱中，随后使用10%甲醇/水混合溶液洗脱无机离子，使柱保持洁净，然后使用15%methanol/纯水混合溶液洗除大部分杂质，最后使用浓甲醇溶液进行草甘膦和异丙草胺的洗提。
4）草铵膦样品洗提：取固相萃取后的样品溶液，加入草铵膦离子钠ETDA、草铵膦离子等内标物，然后进行减压蒸干到干燥。使用10%甲醇/水混合溶液洗去大部分杂质，浓度调整之后可以进行HPLC分析。
2.色谱条件
2.1色谱柱
草甘膦、异丙草胺和草铵膦都是极性化合物，一般采用反相色谱柱进行分析。最常用的是C18反相色谱柱。硫酸钠乙酯具有较低的极性，可以选择固体核壳柱等分离。
2.2流动相
草甘膦分离可以使用含有氨水和有机溶剂混合的流动相，常用甲醇/水或乙腈/水混合物（酸性和碱性同样都有用过）；异丙草胺分离可以采用甲醇/水或乙腈/水混合物；草铵膦分离可以用含有十氢萘酚钠(NaDHP)和草铵膦的混合物，以氢氧化钾调节pH；硫酸钠乙酯分离可以使用甲醇/水混合物。
2.3流速
不同的分析方法具有不同的流速要求。一般来讲，流速在0.5–2.0mL/分钟之间进行，但也会根据柱使用和分析方案因素而有所不同。
2.4柱温
HPLC在某些情况下需要进行恒温。一般来讲，反相柱需要保持在室温下进行分析。
3.检测方法
3.1UV检测器
UV检测器是HPLC中最常用的检测方法。它通过驱动样品流经极性C18柱或其他适当的反相色谱柱，利用254nm波长检测去除骨架结构的草甘膦，也可以用210nm波长进行敏感检测。草铵膦可以使用170nm(nm)或210nm来检测。异丙草胺可以在210nm处进行检测，而硫酸钠乙酯可以用210nm波长检测。这种方法基本上是准确、快速和灵敏的。
3.2质谱检测器
如果需要更准确和高灵敏度的检测结果，则可采用质谱检测器。质谱检测器包括电喷雾质谱检测器（ESI-MS）、气相质谱检测器（GC-MS）等。
4.数据处理
HPLC检测结果通过数据处理进行分析和展示。在有效的色谱分析后，需要将结果与对照样品进行比较，用于鉴定化合物的存在和浓度。通常用内标方法矫正因不同操作而引起的色谱峰面积变化。然后可以通过软件程序计算出样品中含有的化合物浓度。
结论
本文介绍了草甘膦、异丙草胺、草铵膦和硫酸钠乙酯四种除草剂的高效液相色谱分析方法。样品的前处理和色谱条件各有不同，但总体流程相似。由于反相柱、流动相和UV检测器是常见枪雕分析中使用的方法，所以可以用于试图进行合成，监测或针对除草剂式样的不存在而展开的分析。这些方法可以用于食品和环境监测中的化学品分析，并具有准确、灵敏度和可重复性好的优点。