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一种适合蚊虫总RNA提取及样本保存的方法
随着基因组学、转录组学等技术的发展，RNA提取已经成为了分子生物学研究中重要的步骤之一。在研究蚊虫的生命活动和科学探索方面，RNA提取是逃不开的一步。然而，由于蚊虫个体较小，并且蚊虫样品的数量时常需要大量的处理，因此针对蚊虫样品的RNA提取方法也需要被开发出来。本论文结合多篇文献的研究成果，总结出适合蚊虫总RNA提取的方法以及蚊虫样品保存方法。
1.蚊虫总RNA提取方法
1.1组织样品的采集与保存
在蚊虫总RNA提取过程前，组织样品的采集及保存是非常重要的。在采集过程中，为避免RNA降解，需要避免手接触到组织样品，且采集完成后的组织样品要立即冰冻存储。另外，避免重复冻融以模拟RNA降解。
1.2组织样品的研磨
因为蚊虫组织样品的大小比较小，一般需要对样品进行研磨处理。研磨的方法有很多，可以使用液氮，也可以使用试剂盒内配备的细胞破碎试剂。在使用细胞破碎试剂的方法中，需要注意的是研磨次数不要过多以避免样品的降解，同时还要注意细胞破碎试剂的使用时间。建议每次取出适量细胞破碎试剂使用，并在使用后立即放回冰箱保存。
1.3RNA的提取和纯化
对于蚊虫总RNA的提取，常用的试剂盒有QIAGENRNeasyMiniKit和Bio-RadRNAIsolationKit等。以QIAGENRNeasyMiniKit为例，提取总RNA的方法如下：
（1）将20mg的组织样品放到无菌2mL离心管中，加入600μL氯仿甲醇（4:1）混合液，翻转混合。
（2）在样品前面过滤膜的位置插入一个用量相符的管尖，设定最大旋转速度，放入试剂盒提取柱中，进行离心。将悬浊液加载到QIAGENRNeasyMiniKit试剂盒中。
（3）分步添加提取试剂并离心，根据试剂盒说明书的操作步骤完成以下工作：添加70%酒精，添加RW1（含β-葡萄糖苷酸酰胺），在前面过滤膜上洗脱液中添加RNAwash时缓冲液、尾端洗脱液和液氮冷却的DNaseI各一次，离心去除废液。
（4）为了保证总RNA的质量，需要给总RNA样品进行退火，在60°C的恒温箱中以110rpm的速度退火30min左右。退火完后进行RNA浓度和纯度检测。
2.蚊虫样品的保存方法
为了保证样品的RNA质量，不会因为冰冻样品的长时间保存而受到损坏或降解，建议使用以下方法进行保存：
（1）利用液氮保存
液氮能够让样品以最低的温度保存，防止样本RNA被降解。在保存过程中，需要使用专门的架子将样品放置于液氮中，同时需要注意每个样品的标签。在获取样品时，可用包裹液氮手套将样品放入样品管中，以免手接触到样品而容易导致样品RNA的降解。
（2）利用RNA保护剂（RNAlater）
RNAlater是一种液态的RNA保护剂，可用于保存蚊虫多种样本类型和组织样品。它的作用是迅速包裹RNA分子以保持其在切断的状态下稳定，适用于冰箱温度下低于-20℃和室内温度存储。在使用过程中，可以将RNAlater直接加入样品管中，避免RNA在保存过程中受到降解。
总之，蚊虫总RNA提取及样品保存是分子生物学研究中不可缺少的步骤。针对蚊虫样品，可以采用RNAlater保护剂进行保护，在提取的过程中，应注意组织样品的采集及保存，以保证总RNA的质量。市面上有多种试剂盒可供选择进行RNA提取，其中QIAGENRNeasyMiniKit操作步骤简单，且提取出的RNA质量高，常用于蚊虫总RNA的提取。