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酶联免疫法检测虾中的呋喃唑酮（共5篇）

第一篇：酶联免疫法检测虾中的呋喃唑酮酶联免疫法检测虾中的呋喃唑酮代谢物摘要建立养殖虾类中AOZ残留ELISA筛选方法。方法:酸性条件下利用2-硝基苯甲醛衍生化,乙酸乙酯提取,正己烷去杂质后进行ELISA分析。结果:方法最低检测限为013Lg/kg,向样品中添加浓度为015、110和310Lg/kg3个梯度标准品溶液时,平均回收率范围为9017%~9519%,RSD为4124%~5142%。结论:实验证明该方法适合养殖虾类中AOZ残留筛选。关键词：虾肉;呋喃唑酮代谢物;ELISA一、前言呋喃唑酮（FZD）,又名痢特灵,是一种广谱抗菌药物，属于硝基呋喃类药物，是人工合成的化学药。常被掺放在饲料中，用于水产品养殖传染病的预防与治疗[1]。药代动力学研究表明，呋喃唑酮在动物体内的代谢非常快，现已明确此类抗生素的原型在体内4d后，就已完全分解成其代谢物，所以分析呋喃唑酮时，只能分析其代谢物[2]。经研究表明，呋喃唑酮的代谢物中有相当数量是以其完整侧链3-氨基-2-恶唑烷酮即AOZ与蛋白结合的残留物形式存在,AOZ进一步代谢可产生具致癌、致突变作用的羟乙基肼[3]，因此检测呋喃唑酮代谢物(AOZ)的残留更具有现实意义。呋喃唑酮在畜产品和水产品中的残留，通过食物链传递给人类,会使人体受到损害。另外,其作为人畜共用药，长期微量摄入易使人体产生抗药性，导致呋喃唑酮药物失去医疗功效[4]。1990年7月欧盟颁布2377/90/EEC条例，将硝基呋喃类药物及其代谢产物列为A类禁用药物，规定其在动物源性食品中的残留检测限为1.0μg/kg。由于对呋喃唑酮蛋白结合态残留物的安全性产生怀疑，自1995年起欧盟、日本、美国等都开始禁止这类抗菌剂在食用的畜禽及水产动物中使用，并严格执行对输入的食用鱼，虾及禽类进行残留检测[5]。同许多国家一样，我国农业部制订的NY5070-2002《无公害食品水产品中鱼药残留限量》及GB18406.4-2001《无公害水产品安全要求》规定，水产品中不得检出呋喃唑酮，同时禁止在饲料中添加[6]。目前呋喃唑酮在食品中残留的监测方法主要有高效液相色谱法[7-8]、酶联免疫法[9]、分光光度法、原子吸收法[10]等，酶联免疫法已受到广泛重视。本试验主要使用酶联免疫法对出口虾中呋喃唑酮代谢物AOZ的残留做快速检测。福建省诏安县海利水产有限公司，是一家集水产品加工、销售、研究、开发和养殖于一体的大型出口企业。该公司于2005年引进投建，厂房和生产布局按照《出口食品生产企业卫生注册登记管理规定》和美国FDA法规及欧盟指令进行设计建造，厂区占地面积八万平方米，全封闭配套中央空调的水产加工车间二万平方米，生产车间配套高效臭氧杀菌设施，制冷水机和大型制冰机等各种先进加工设备，冻库储存能力达6000吨，同时配套建设大型对虾养殖场及虾苗孵化场，拥有一支高素质员工队伍，年加工生产水产品15000吨以上，产品近二十种，主要有冻生虾、冻熟虾、冻面包虾、寿司虾、冻鱿鱼、冻罗非鱼等。公司秉承共同发展的目标，不断完善质量管理体系，执着追求品质,先后获得了《卫生注册证书》、《输美水产品HACCP验证证书》，2005年11月通过了BRC认证，2006年1月通过了ISO9001认证，2008年通过了欧盟相关质量认证，产品获得了国外消费者的肯定和喜欢，远销日本、美国、加拿大、墨西哥和香港等国家和地区，在国外赢得了市场。公司自建成投产以来，企业迅速发展壮大。1材料与方法1.1样品均来自福建省海利水产有限公司。1.2主要仪器及设备MK3型酶标仪:Thermo公司；Scientz-10型均质机：宁波新芝生物科技股份有限公司；ALC.210.4电子天平:ACCULAB；DRP-9082型恒温培养箱：上海森信实验仪器有限公司；4K15型高速冷冻离心机：Sigma公司；HH-w600s恒温水箱：山东鄄城新科教学仪器厂；MS1Minishaker:IKA；1000、200、20μL微量移液器：GILSON。1.3试剂与溶液呋喃唑酮代谢产物-AOZ试剂盒：北京望尔生物技术有限公司；灵敏度为0.125μg/kg，包括：AOZ标准溶液（0、0.05、0.15、0.45、1.35、4.05ng/mL）、浓缩缓冲液、浓缩提取/洗涤液、衍生试剂、浓缩酶标记物、底物溶液、反应终止液。正己烷，乙酸乙脂，1mol/LNaOH，1mol/LHCl。1.4方法1.4.1样品处理虾去头去壳，取可食用部分，制成均质物。1.4.2样品制备1）称取1g已均质的样品于50mL离心管中，依次加入4mL超纯水、1.5mL1mol/LHCl，100μL衍生试剂，漩涡振荡1min。置37℃的恒温培养箱中温育，静置过夜（约16h）。2）加入5mL原倍缓冲液，0.4mL1mol/LN