一种蚯蚓多肽提取物的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106755257A(43)申请公布日2017.05.31(21)申请号201611263539.1(22)申请日2016.12.30(71)申请人潍坊医学院地址261053山东省潍坊市潍城区宝通西街7166号(72)发明人庄宝祥(74)专利代理机构潍坊正信致远知识产权代理有限公司37255代理人王伟霞(51)Int.Cl.C12P39/00(2006.01)C12P21/06(2006.01)C07K1/34(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种蚯蚓多肽提取物的制备方法(57)摘要本发明涉及一种多肽制备方法，具体涉及一种蚯蚓多肽提取物的制备方法，包括(1)预处理：取新鲜蚯蚓清洗干净，匀浆，超声浸提；(2)发酵处理：将混合菌种加入固液混合体中，调pH,发酵；(3)一次酶解：向发酵混合物中加入菠萝蛋白酶，调pH，灭酶，得到酶解物；(4)二次酶解：将胃蛋白酶加入到酶解物，进行酶解处理，将所得酶解产物离心去渣，收集上清液；(5)超滤处理：取步骤(4)中的上清液经过超滤膜超滤，然后再将所得滤液经过纳滤膜截留，将所得截留液冷冻干燥得到蚯蚓多肽。本发明通过发酵与酶解相结合的方法制备的蚯蚓多肽提取物，颜色好、无腥味和苦味，具有较好的抗氧化活性，而且此法还大大提高了多肽的提取率。CN106755257ACN106755257A权利要求书1/1页1.一种蚯蚓多肽提取物的制备方法，其特征在于所述制备方法包括下列步骤：(1)预处理：取新鲜蚯蚓清洗干净，然后在0.5～1mg/L的蔗糖溶液中浸泡，捞出后再将蚯蚓置于生理盐水中浸泡，待生理盐水中无泥沙污物时将蚯蚓捞出沥干，然后按照料液比1:10～20的比例加入0.15～0.3mol/L的氯化钾溶液，匀浆，超声浸提，得到固液混合体；(2)发酵处理：取步骤(1)中的固液混合体，加入固液混合体重量0.05～0.15倍的混合菌种，调pH3～6,温度控制在30～37℃发酵12～24h，得到发酵混合物；(3)一次酶解：取步骤(2)中的发酵混合物，加入发酵混合物重量0.02～0.1倍的菠萝蛋白酶，调pH5～7.5，温度控制在50～60℃进行酶解15～30min，灭酶，得到酶解物；(4)二次酶解：取步骤(3)中的酶解物，加入酶解物重量0.02～0.05倍的胃蛋白酶，在维持胃蛋白酶活性条件下进行酶解处理，将所得酶解物离心去渣，收集的上清液为蚯蚓多肽粗提掖；(5)超滤处理：取步骤(4)中的蚯蚓多肽粗提液经过超滤膜超滤，然后再将所得滤液经过纳滤膜截留，将所得截留液冷冻干燥得到蚯蚓多肽提取物。2.根据权利要求1所述的一种蚯蚓多肽提取物的制备方法，其特征在于：步骤(1)中超声浸提条件：超声功率80～200w，超声时间10～25min，超声温度30～45℃。3.根据权利要求1所述的一种蚯蚓多肽提取物的制备方法，其特征在于：步骤(2)中混合菌种为乳酸菌、酵母菌和曲霉菌，且所述乳酸菌、酵母菌和曲霉菌的质量比为0.1～0.5:0.15～0.35:0.12～0.3。4.根据权利要求3所述的一种蚯蚓多肽提取物的制备方法，其特征在于：所述乳酸菌、酵母菌和曲霉菌的质量比为0.43:0.3:0.25。5.根据权利要求1所述的一种蚯蚓多肽提取物的制备方法，其特征在于：步骤(4)中的酶解温度为30～37℃，酶解时间为10～25min。6.根据权利要求2所述的一种蚯蚓多肽提取物的制备方法，其特征在于：步骤(1)中超声浸提条件为：超声功率160w，超声时间15min，超声温度40℃。2CN106755257A说明书1/6页一种蚯蚓多肽提取物的制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种多肽制备方法，具体涉及一种蚯蚓多肽提取物的制备方法。背景技术[0002]活性肽广泛存在于自然界中，生物体很多活性物质都以肽的形式存在，没有肽，就没有活性，没有生命。科学家们研究发现了具有免疫调节、激素调节、酶调节、抗病毒、降血压和降血脂等功能性肽。由于功能性肽的特殊功能，使得人们对它需求增加，现在已提取出多种功能性肽多用于医用和保健，如功能性大豆蛋白肽已经用于降血脂。[0003]蚯蚓为环节动物门寡毛纲动物，可改量土壤，促进农业增产，在物质循环、生物多样性、保护生态环境等方面发挥着特殊作用。此外，蚯蚓还是我国常用中药，名为地龙。研究发现，蚯蚓具有治疗心血管疾病、癌症、哮喘等多种药理作用，同时还具有增强免疫力，促进伤口愈合等作用。蚯蚓中含有丰富的人体所需营养物质，包括蛋白质、核酸、微量元素、维生素等。其中蛋白质总量约占干质量的45.9％～68.11％。蚯蚓经酶水解可获得小分子多肽和氨基酸，不仅可以提供均衡的、易于吸收的营养物质，而且蚯蚓肽还具有抗氧化、增强免疫、抗菌等生理活性，在保