一种脱细胞基质源组织工程支架及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105935454A(43)申请公布日2016.09.14(21)申请号201610188734.6A61L27/44(2006.01)(22)申请日2016.03.29A61L27/50(2006.01)A61L27/58(2006.01)(66)本国优先权数据201520728859.42015.09.18CN(71)申请人广州市美昊生物科技有限公司地址510663广东省广州市高新技术产业开发区科学城掬泉路国际企业孵化器D区406室申请人冠昊生物科技股份有限公司(72)发明人张伟王志杰唐容徐斌(74)专利代理机构北京万贝专利代理事务所(特殊普通合伙)11520代理人陈领(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图1页(54)发明名称一种脱细胞基质源组织工程支架及其制备方法和应用(57)摘要本发明涉及一种脱细胞基质源组织工程支架及其制备方法和应用，所述脱细胞基质源组织工程支架是以处理后的动物膜材作为生物膜基材，在所述生物膜基材的表面粘附胶原蛋白疏松层。所述脱细胞基质源组织工程支架的制备方法包括脱脂、脱细胞、去除抗原、交联固定、胶原蛋白提取及胶原复合等工艺步骤。本发明选用柔韧而光滑的动物膜材作为生物膜基材，克服了单纯胶原支架力学性能差和降解速率过快的缺点；配合胶原蛋白疏松层，为组织再生性修复和细胞生长提供良好微环境；脱细胞基质源组织工程支架材料植入体内后，会随着缺损组织的修复而逐渐降解，且降解时间可控制，不作为永久异物存在，无任何残留毒性。CN105935454ACN105935454A权利要求书1/2页1.一种脱细胞基质源组织工程支架，其特征在于：以处理后的动物膜材作为生物膜基材，在所述生物膜基材的表面粘附胶原蛋白疏松层。2.根据权利要求1所述的一种脱细胞基质源组织工程支架，其特征在于：所述胶原蛋白疏松层是由动物肌腱组织制得。3.根据权利要求2所述的一种脱细胞基质源组织工程支架，其特征在于：所述生物膜基材有糙面和光面，所胶原蛋白疏松层粘附于糙面上。4.根据权利要求1所述的一种脱细胞基质源组织工程支架，其特征在于：所述胶原蛋白疏松层的厚度为0.1～3.0mm，孔隙率为65～86％，孔径为50～300μm。5.根据权利要求1-4任一所述的脱细胞基质源组织工程支架的制备方法，其特征在于：包括的步骤如下：(1)生物膜基材的制备；(2)胶原蛋白的制备；(3)胶原复合：将胶原蛋白粘附于生物膜基材的糙面上，干燥。6.根据权利要求5所述的一种脱细胞基质源组织工程支架的制备方法，其特征在于：包括的步骤如下：(1)预处理：取新鲜的动物膜材和肌腱组织，洗净，消毒，并去除脂肪组织、纤维和绒毛组织；(2)脱脂：使用有机溶剂抽提萃取动物膜材和肌腱组织，去除脂肪及脂溶性杂质；(3)脱细胞：使用表面活性剂溶液并结合蛋白酶溶液，控制表面活性剂的质量终浓度为0.1～0.5％，蛋白酶的质量终浓度0.1～0.3％，超声消化动物膜材和肌腱组织；(4)去除抗原：使用活泼试剂，在pH值为7～8条件下与动物膜材与肌腱组织反应24～48h，然后用强氢键试剂，在pH值为7～8条件下与动物膜材与肌腱组织反应24～48h，得到彻底去除抗原后的生物膜基材和肌腱组织；(5)交联固定：使用质量浓度为0.5～5％的非醛类化学交联剂溶液，在pH值为7～8搅拌条件下，与经过去除抗原处理后的生物膜基材反应2～8天；(6)胶原蛋白提取及纯化：使用质量浓度为0.05～0.2％的酸溶液溶解经去除抗原处理后的肌腱组织，捣碎，然后在pH值为3～5的酸性条件下使用质量浓度0.1～0.4％的蛋白酶溶液继续溶解，析出胶原蛋白，过滤，再使用质量浓度为0.1～0.5％的表面活性剂溶液浸泡，水洗后得到胶原蛋白纯品；(7)胶原复合：将胶原蛋白纯品真空干燥后制成胶原蛋白粉末，将胶原蛋白粉末溶解成胶原蛋白溶液后平铺于经交联固定的生物膜基材的糙面上，真空干燥。7.根据权利要求6所述的一种脱细胞基质源组织工程支架的制备方法，其特征在于：所述动物膜材是心包膜、肠膜或脂网膜中一种或两种以上。8.根据权利要求6所述的一种脱细胞基质源组织工程支架的制备方法，其特征在于：所述活泼试剂是小分子有机酸酐、酰氯、酰胺、环氧化物或卤甲烷中一种或两种以上；所述强氢键试剂为胍类化合物。9.根据权利要求8所述的一种脱细胞基质源组织工程支架的制备方法，其特征在于：胍类化合物为盐酸胍溶液，所述盐酸胍溶液的浓度为3～8mol/L。10.根据权利要求6所述的一种脱细胞基质源组织工程支架的制备方法，其特征在于：2CN105935454A权利要求书2/2页所述非醛类化学交联剂是环氧化物、二酰二胺、二异氰酸酯、聚乙二醇或碳化二亚胺试剂中的一种或