一种人卵母细胞体外成熟培养液及其制备方法和培养方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109628385A(43)申请公布日2019.04.16(21)申请号201910049864.5(22)申请日2019.01.18(71)申请人周桦地址558400贵州省贵阳市云岩区贵医20号申请人何志旭赵淑云(72)发明人周桦(51)Int.Cl.C12N5/075(2010.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种人卵母细胞体外成熟培养液及其制备方法和培养方法(57)摘要本发明公开了一种人卵母细胞体外成熟培养液及其制备方法和培养方法，涉及医学技术领域，其配方以质量份数计包含以下组分：其配方以质量份数计包含以下组分：75IU/LrFSH70-95份，150IU/LrHCG60-70份，20%SPS50-55份，2mg/LEGF30-40份，25mmol/L丙酮酸钠20-25份和基本细胞培养液Qiunn’s1029150-200份。该人卵母细胞体外成熟培养液及其制备方法和培养方法，可以有效降低购买商品化体外成熟培养基的成本，该培养基以人囊胚培养液Qiunn’s1029为基础培养基，该培养基安全无毒副作用，能够促使未成熟卵母细胞特别是三级卵丘-卵母细胞复合体中的卵母细胞减数分裂，提高该类细胞的体外发育能力，促进细胞质成熟，提高细胞成熟后的卵裂率和囊胚发育率，进一步提高胚胎质量。CN109628385ACN109628385A权利要求书1/1页1.一种人卵母细胞体外成熟培养液，其特征在于：其配方以质量份数计包含以下组分：75IU/LrFSH70-95份，150IU/LrHCG60-70份，20%SPS50-55份，2mg/LEGF30-40份，25mmol/L丙酮酸钠20-25份和基本细胞培养液Qiunn’s1029150-200份。2.根据权利要求1所述的一种人卵母细胞体外成熟培养液的制备方法，其特征在于：其制备方法如以下步骤：S1，首先将基本细胞培养液Qiunn’s1029放入反应釜内部，并加入75IU/LrFSH和150IU/LrHCG，之后启动反应釜，使其进行充分混合，之后放置30分钟使其充分融合；S2，依次将20%SPS、2mg/LEGF和25mmol/L丙酮酸钠依次加入反应釜内部，并同时启动反应釜，温度保持在5℃，混合30分钟使其进行充分混匀；S3，将步骤S2中得到的半成品放入医用冰箱内部，冰箱内部温度保持在2-8℃，制备完成。3.根据权利要求2所述的一种人卵母细胞体外成熟培养液的培养方法，其特征在于：其培养方法包括以下步骤：S1，在患者取卵前一日，将人卵母细胞体外成熟培养液放入恒温培养箱内部平衡16-18小时；S2，患者取卵日用滑动法辨认和拾捡卵泡液中的未成熟卵母细胞，常规HEPE’s人输卵管液冲洗后倒置显微镜下观察，未排出第一极体的MI期卵母细胞和卵胞浆内仍然可见生发泡的GV期卵母细胞为未成熟卵母细胞，再次使用人卵母细胞体外成熟培养液将其冲洗，随后将人未成熟卵母细胞放入人卵母细胞体外成熟培养液1mL中，恒温培养箱内5%O2、5%CO2、37℃条件下进行培养26-28小时；S3，将步骤S2中完成培养的人卵母细胞取出，酶消化后剥卵针将人卵母细胞体周围的卵丘细胞剥除；S4，最后将步骤S5剥除完成的人卵母细胞体放在倒置显微镜下，进一步观察和确认卵母细胞的成熟情况，以卵母细胞排出第一极体，成为MII期卵母细胞为卵子成熟的标志。4.根据权利要求3所述的一种人卵母细胞体外成熟培养液的培养方法，其特征在于：所述通过酶消化后剥卵针机械去除人卵母细胞体周围的卵丘细胞。5.根据权利要求3所述的一种人卵母细胞体外成熟培养液的培养方法，其特征在于：所述恒温箱内部温度应保持为37℃，CO2浓度保持在5%、O2浓度保持在5%。2CN109628385A说明书1/4页一种人卵母细胞体外成熟培养液及其制备方法和培养方法技术领域[0001]本发明涉及医学技术领域，具体为一种人卵母细胞体外成熟培养液及其制备方法和培养方法。背景技术[0002]卵母细胞是指在卵子发生过程中进行减数分裂的卵原细胞，分为初级卵母细胞、次级卵母细胞和成熟的卵母细胞，它们分别是卵原细胞分化和DNA复制分裂后产生、第一次减数分裂和第二次减数分裂的产物。[0003]卵母细胞外成熟技术作为作为辅助生殖技术的重要组成部分，不但可以提高卵母细胞的成活效率，减少卵巢过度刺激综合征的发生，也为赠卵女性生殖力保存提供了更多选择，但现有的培养液的制备方法购买商品化体外成熟培养基的成本较高，人卵母细胞体外成熟率低，培养基制备方法和培养方法复杂，为此，我们提供了一种人卵母细胞体外成熟培养液及其制备方法和培养方法来解决这一问题。发明内容[0004]本发明的目的就是为了弥补现有技术的不足，提供了一种人卵母细胞体外成