PCR技术及其延伸与应用(课堂PPT).ppt

PCR技术在医学领域的应用聚合酶链反应或多聚酶链反(PolymeraseChainReaction,PCR）又称无细胞克隆技术(“freebacteria”cloningtechnique)特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。在数小时内可使几个拷贝的模板序列甚至一个DNA分子扩增107～108倍，大大提高了DNA的得率。PCR技术最早由美国Cetus公司人类遗传研究室KaryMullis及同事于1985年发现并研制成功的；最早的应用报道是Saiki等1985年将PCR技术应用于β-珠蛋白基因扩增和镰刀状红细胞贫血的产前诊断。使用1976年Chien等分离的热稳定性TaqDNA聚合酶，使PCR操作大为简化，并使PCR自动化成为可能；1987年KaryMullis等完成了自动化操作装置，使PCR技术进行实用阶段。PCR已获得广泛应用,目前，每年都有上千篇文章发表。1991年，期刊“PCR方法与应用”（PCRMethodsandApplication）在美国创刊，使有关学者有了自己的论坛和参考的专业期刊。KaryMullis因发明了“聚合酶链式反应”而获得1993年度诺贝尔化学奖。(一名加拿大籍英国科学家MichaelSmith因开创了“寡核苷酸基因定点诱变”的方法而与Mullis同享此荣)PCR技术检测细菌PCR与病毒类疾病应用诊断遗传疾病PCR的特点高度敏感：理论上PCR可以按2n倍数扩增DNA十亿倍以上。应用证实可以将极微量的靶DNA成百万倍以上地扩增到足够检测分析量的DNA。能从100万个细胞中检出一个靶细胞，或对诸如病人口液等只含一个感染细胞的标本或仅含0.01pg的感染细胞的特异性片段样品中均可检测。快速简便可扩增RNA或cDNA试剂操作程序PCR反应基本条件及其对PCR的影响引物缓冲液Mg2+三磷酸脱氧核苷酸－dNTP耐热DNA聚合酶温度循环参数PCR实验中常见问题对策假阴性假阳性PCR技术的延伸反转录PCR-ReversetranscriptionPCR．RT－PCR反应体系TouchdownPCR梯度PCR巢（套）式PCR-nestedPrimerPCR复合PCR－MultiplexPCR反向PCR－ReversePCR谢谢